Длина цепи на штиль 180: Бензопила Sthil MS 180 цепь: типы, заточка, натяжение…. | Все о бензопилах

Таблица цепей и шин Stihl для бензопил, электропил, маркировка

ТАБЛИЦА ЦЕПЕЙ, ШИН STIHL
Применяется к модели Stihl	Длина шины	Шаг цепи	Паз шины	Кол.во звеньев	Ссылка
MS 170, MS 180, MS181, MS192(T), MS 193; MSE140, HT75, HT101, HT131, HT-KM, HTE-60, MSА 160; 200.	30 см / 12 дюймов	3/8”	1,1 мм	44 зв.	Бухта Цепь Шина
MS 170, MS 180, MS181, MS192(T), MS 193; MSE140, HT75, HT101, HT131, HT-KM, HTE-60, MSА 160; 200.	35 см / 14 дюймов	3/8”	1,1 мм	50 зв.	Бухта Цепь Шина
MS180, MS181, MS192(T),  MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE160, MSE180	25 см / 10 дюймов	1/4”	1,3 мм	56 шт.
MS180, MS181, MS192(T),  MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180	30 см / 12 дюймов	1/4”	1,3 мм	64 шт.
MS180, MS181, MS192(T),  MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180	30 см / 12 дюймов	3/8”	1,3 мм	44 шт.
MS240,  MS260,  MS261	32 см / 13 дюймов	3/8”	1,3 мм	50 шт.
MS200,  MS210,  MS211,  MS230, MS250	35 см / 14 дюймов	1/4”	1,3 мм	72 шт.
MS180, MS181, MS192(T),  MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180	35 см / 14 дюймов	3/8”	1,3 мм	50 шт.
MS180, MS181, MS192(T),  MS200(T), MS210, MS211, MS230, MS250, MSE140, MSE160, MSE180	40 см / 16 дюймов	3/8”	1,3 мм	55 шт.
MS240,  MS260,  MS261	40 см / 16 дюймов	3/8”	1,3 мм	60 шт.
MS210, MS211, MS230, MS250,  MSE140, MSE160, MSE180, MS200(T),  MSE140, MSE160, MSE180, MS200(T), MSE140, MSE160, MSE180 – 61 звено)	45 см / 18 дюймов	3/8”	1,3 мм	62 шт.
MS240,  MS260,  MS261	45 см / 18 дюймов	3/8”	1,3 мм	66 шт.
MS240,  MS260,  MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390	32 см / 13 дюймов	0,325”	1,5 мм	56 шт.
MS210, MS211, MS230, MS250	35 см / 14 дюймов	0,325”	1,5 мм	56 шт.
MS240,  MS260,  MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362	37 см / 15 дюймов	0,325”	1,5 мм	62 шт.
MS240,  MS260,  MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390	32 см / 13 дюймов	0,325”	1,6 мм	56 шт.
MS240,  MS260,  MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362	32 см / 13 дюймов	3/8”	1,6 мм	50 шт.
MS210, MS211, MS230, MS250	35 см / 14 дюймов	0,325”	1,6 мм	56 шт.
MS240,  MS260, MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460,  MSE220 MS440, MS441, MS460 – 64 звена,   MSE220– 63звена)	37 см / 15 дюймов	0,325”	1,6 мм	62 шт.
MS240,  MS260, MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MSE220   MSE220	37 см / 15 дюймов	3/8”	1,6 мм	56 шт.
MS210, MS211, MS230, MS250	40 см / 16 дюймов	0,325”	1,6 мм	62 шт.
MS240, 026,  MS260,  MS261, MS270, MS280, MS290, MS390, MSE220,  MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS341, MS361,MS362, MS440, MS441, MS460 68 звеньев	40 см / 16 дюймов	0,325”	1,6 мм	67 шт.
MS240, MS260, MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MSE220	40 см / 16 дюймов	3/8”	1,6 мм	60 шт.
MS650, MS660	40 см / 16 дюймов	0,404”	1,6 мм	55 шт.
MS250	45 см / 18 дюймов	0,325”	1,6 мм	68 шт.
MS240, MS260, MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MSE220, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460	45 см / 18 дюймов	0,325”	1,6 мм	74 шт.
MS240, MS260, MS261,  MS270, MS280, MS290, MS390, MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MSE220	45 см / 18 дюймов	3/8”	1,6 мм	66 шт.
MS650, MS660	45 см / 18 дюймов	0,404”	1,6 мм	60 шт.
MS341, MS361, MS362, MS440, MS441, MS460, MS290, MS390, MSE220 MS290, MS390, MSE220	50 см / 20 дюймов	0,325”	1,6 мм	82 шт.
MS290, MS390, MS341, MS360, MS361, MS362,  MS440, MS441, MS460,  MS460R,  MS650, MS660, MSE220	50 см / 20 дюймов	3/8”	1,6 мм	72 шт.
MS650, MS660	50 см / 20 дюймов	0,404”	1,6 мм	66 шт.
MS290, MS390, MS440, MS441, MS460, MS650, MS660, MS780, MS880	63 см / 25 дюймов	3/8”	1,6 мм	84 шт.
MS440, MS441, MS460, MS650, MS660	75 см / 30 дюймов	3/8”	1,6 мм	98 шт.
MS780, MS880	150 см / 60 дюймов	0,404”	1,6 мм	173 шт.

Бензопила Stihl MS 180 C-BE 16 40 СМ 11302000480

Бензопила Stihl MS 180 C-BE 16 40 см является улучшенной версией пилы Stihl MS 180 — у нее есть система облегчения запуска ErgoStart и боковое натяжение цепи без использования инструмента. Инструмент подходит для заготовки дров, формирования крон деревьев, сучков, возведения деревянных конструкций, распиливания стволов деревьев, а также выполнения других несложных хозяйственных работ. Цепная бензопила Штиль обладает высокими режущими способностями, широкой функциональностью и небольшим весом. Высокий уровень эргономики обеспечивает удобство эксплуатации независимо от сложности поставленной задачи. Устройство оснащено 16-дюймовой шиной (40 см), обеспечивающей возможность работать с деревьями диаметром до 35 см.

Бензиновая пила STIHL MS 180 C-BE имеет современную систему защиты от вибрации. Антивибрационная система располагается в зоне ручек пилы, и значительной мере заглушает вибрацию, передающуюся с двигателя.

Инструмент ооснащен современной системой смазки, регулирующей количество подачи смазки. Кнопка управления холодным и горячим запуском, включением и выключением инструмента представлена отдельным рычагом. Это делает обращение с пилой безопасным, поскольку рука оператора всегда остается на рукоятке.

 

Особенности и преимущества Stihl MS 180 C-BE 16 40 см

• Система облегчения запуска ErgoStart
• Боковое нажатие цепи без использования инструмента
• Малый вес
• Удобство
• Цепной тормоз QuickStop
• Безопасность
• Быстрое натяжение цепи
• Современная система защиты от вибрации
• Современная система смазки

Оснащение

Тормоз QuickStop для моментальной остановки цепи

Цепной тормоз QuickStop — это защитный механизм при работе с бензопилами. Цепной тормоз срабатывает при нажатии на передний упор для рук и за считанные доли секунды останавливает пильную цепь. При достаточно сильной отдаче цепной тормоз QuickStop срабатывает автоматически.

Антивибрационная система

Сильная вибрация в зоне рукояток может привести к хроническим нарушениям кровообращения в руках. Поэтому компания STIHL разработала высокоэффективную антивибрационную систему (АС). У инструментов с АС вибрация двигателя передающаяся на рукоятки заметно снижается.

Компенсатор

Компенсатор STIHL — регулирующий орган в карбюраторе — обеспечивает почти постоянные мощность двигателя, качество выхлопа и расход топлива в течение длительного времени несмотря на увеличивающееся загрязнение воздушного фильтра. Прочищать воздушный фильтр требуется только при ощутимом падении мощности. Становится возможной работа в течение длительного времени без техобслуживания.

Система смазки цепи Ematic

Система STIHL Ematic состоит из направляющей шины Ematic, пильной цепи Oilomatic и масляного насоса с регулируемой подачей. Особая конструкция шины и цепи заставляет каждую каплю масла попасть именно туда, где оно требуется для смазывания. Это позволяет сократить расход масла на 50 %.

Система облегченного запуска ErgoStart

Спиральная пружина между катушкой пускового тросика и коленвалом компенсирует пиковые усилия, теперь на тросике почти не ощущается толчков. Результат: STIHL ErgoStart по сравнению с традиционными пусковыми устройствами уменьшает усилие наполовину, а скорость запуска — примерно на две трети.

Однорычажное управление

Такими функциями машины, как холодный и горячий запуск, работа и выключение, управляет отдельный рычаг. Это делает управление особенно удобным и безопасным, так как правая ладонь остается на рукоятке.

Система быстрого натяжения цепи (B)

Фирменная система быстрого натяжения цепи STIHL (B) превращает натяжение пильной цепи в детскую забаву. Нужно лишь ослабить гайку крепления крышки цепной звёздочки, и с помощью регулировочного колесика легко и быстро натянуть цепь. Инструмент для этого не требуется.

Обнаружив ошибку или неточность в тексте или описании товара, выделите ее и нажмите Shift+Enter.

Обзор бензопил STIHL MS 170, MS 180, MS 180 C-BE

Назначение

Бензопилы STIHL MS 170, MS 180, MS 180 C-BE открывают модельный ряд бытовых бензопил STIHL. Эти агрегаты прекрасно подойдут для заготовки дров, ухода за садовым участком и для валки небольших деревьев.

Данное семейство пил выпускается уже более 20 лет и за это время для большинства потребителей словосочетание «бытовая бензопила» прочно ассоциируется с моделью STIHL MS 180. Эти агрегаты имеют проверенную временем конструкцию, просты в применении, неприхотливые, компактные и очень легкие.

Двигатель

Сердце агрегатов – классический 2-х тактный одноцилиндровый двигатель внутреннего сгорания STIHL. Такой мотор обеспечивает простоту конструкции, эксплуатации и сервиса, большую мощность, высокие обороты и отличное ускорение.

Все 2-х тактные двигатели STIHL работают на смеси бензина и специального масла STIHL HP или STIHL HP Ultra на минеральной и синтетической основе соответственно. Соотношение топливной смеси при этом строго 1:50 (20мл масла на 1л бензина).

Особенности семейства бензопил MS 170 и MS 180

Бензопилы STIHL MS 170 и MS 180 обладают всеми преимуществами бензопил STIHL, которые описаны в статье «Бензопилы STIHL: выбор очевиден», но обладают рядом особенностей:

• Антивибрационная система данных агрегатов состоит из трех резиновых элементов размещенных между моторным блоком и рукоятками. Антивибрационная система снижает вибрацию от двигателя и пильной цепи, благодаря чему достигается высокая степень комфорта при пилении.
• Единая крышка на весь моторный блок. Достаточно повернуть небольшой фиксатор и снять крышку, чтобы получить доступ к воздушному фильтру, свече зажигания и ребрам цилиндра.
• Карбюратор с компенсатором обеспечивает постоянную производительность и мощность даже при сильно загрязнённом воздушном фильтре.
• С 2015 года бензопилы MS 170 и MS 180 выпускаются в обновленном современном дизайне. Корпуса этих бензопил выполнены из полиамида — материала прочного и недорогого. Благодаря этому бензопилы MS 170 и MS 180 имеют относительно невысокую стоимость

Отличия MS 170 и MS 180

Пилы MS 170 и MS 180 имеют схожую компоновку и конструкцию практически всех узлов, но различия все-таки присутствуют.

• Главное различие этих моделей заключается в объеме цилиндра и мощности. Бензопила STIHL MS 170 имеет мощность 1,8 лошадиных сил, а бензопила MS 180 имеет мощность 2 лошадиных силы.
• Кроме этого у данных моделей различается расположение натяжителя цепи: У MS 180 натяжитель боковой, а у MS 170 торцевой (рис 1).
• Различия в мощности рассматриваемых агрегатов повлияло и на штатную комплектацию пил: шина и цепь бензопилы MS 170 имеют толщину ведущего звена 1,1 мм, тогда как у MS 180 ширина паза шины и толщина звена цепи 1,3 мм. Благодаря использованию цепи с меньшей толщиной звена и меньшей толщиной пропила Бензопила STIHL MS 170 пилит практически с той-же скоростью, что и MS 180.  

 Сравнительная таблица бензопила STIHL MS 170, MS 180, MS 180 C-BE

Бензопила STIHL MS 180 C-BE

Комфортная версия этих агрегатов – бензопила STIHL MS 180 C-BE с устройством безинструментального натяжения цепи и системой облегченного запуска ErgoStart, суть которого в снижении усилия и скорости протягивания пускового тросика при запуске агрегата. Чтобы завезти мотор бензопилы STIHL MS 180 C-BE не надо обладать специальными навыками, ловкостью и достаточной физической силой для преодоления компрессии двигателя. Достаточно медленно вытянуть тросик стартера и агрегат запустится. Бензопила с системой ErgoStart отлично подойдет для женщин, людей почтенного возраста и пользователей, которые отдают предпочтение комфорту.

Пильная гарнитура

На бензопиле STIHL MS 170 штатно установлены

• Направляющая шина STIHL Rollomatic E Mini 14″ (35 см) (арт. 30055003909) с шагом концевой звездочки 3/8P и толщиной паза 1,1 мм;
• Цепь 61PMMC3 50 звеньев (арт. 36100060050), шаг цепи 3/8P, толщина ведущего звена 1,1 мм;

На бензопиле STIHL MS 180 и MS 180 C-BE штатно устанавливаются 2 различных комплекта пильной гарнитуры

1. с длиной шины 14″ (35 см):

• Направляющая шина STIHL Rollomatic E 14″ (35 см) (арт. 30050004809) с шагом концевой звездочки 3/8P и толщиной паза 1,3 мм;
• Цепь 63PM 50 звеньев (арт. 36130060050).

2. с длиной шины 16″ (40 см):

• Направляющая шина STIHL Rollomatic E 16″ (40см) (арт. 30050004813) с шагом концевой звездочки 3/8P и толщиной паза 1,3 мм;
• Цепь 63PM 55 звеньев (арт. 36130060055).

Где купить бензопилу STIHL MS 170, MS 180, MS 180 C-BE

Купить оригинальную бензопилу STIHL MS 170, MS 180, MS 180 C-BE с гарантией 2 года можно в одном из наших магазинов в г.Рязань и г.Коломна. У нас вы получите исчерпывающую информацию по эксплуатации и обслуживанию агрегатов, полный ассортимент расходных материалов и принадлежностей, гарантийное и постгарантийное обслуживание в собственных сервисных центрах. Если вам нужна шина или цепь для бензопилы MS 170, MS 180 или MS 180 C-BE вы можете посетить один из наших магазинов или проконсультироваться пол телефону. 

как подобрать, узнать размер, какая лучше

Цепь бензопилы выполняет важную функцию при работе. Именно от неё в большей степени зависит производительность и скорость реза.

Правильно подобрав пильную гарнитуру для бензопилы с малой мощностью, можно значительно увеличить характеристики её работы. В этой статье рассмотрим виды цепей и их основные параметры.

Из чего состоит

Современная пильная цепь сделана из звеньев трех типов:

• ведущие;
• соединительные;
• рабочие.

Рабочие зубья делятся на левосторонние и правосторонние. Ведущие, их еще называют хвостовиками, устанавливаются между соединительными и рабочими с определенным шагом, который зависит от размеров звеньев. Соединительные, как понятно из названия, объединяют рабочие и ведущие звенья.

Виды

Два основных вида, которые сейчас можно встретить в продаже: чипперные и чиззельные цепи. Разделение основано на индивидуальных параметрах и форме рабочего зуба.

Чипперные — более универсальные.

Они могут применяться, как обычными пользователями для работы в быту, так и профессионалами для продольного пиления. Наиболее часто профессионалы используют пильные цепи такого вида на бензопилах, работающих в пилорамах типа LOGOSOL. Они, при условии соблюдения необходимого угла заточки (10⁰), способны быстро пилить вдоль волокон, что в пилораме самое важное, при этом их работоспособность и высокая производительность сохраняется длительное время. При необходимости цепи такого вида, как и остальные, можно затачивать, применяя для этого напильник или заточной станок.

Чиззельные – показывают большую производительность при поперечном резе.

Используются профессионалами при валке и раскряжевке. Углы атаки такой цепи агрессивные, она легко врезается и быстро режет, но только поперек волокон. Скорость реза вдоль, даже при условии правильной заточки, у такой гарнитуры меньше.

Ниже представлено видео о видах цепей и критериях выбора для бензопилы. В нем подробно рассказывается об основных параметра гарнитуры. Показывается, как выглядят звенья разных типов и размеров. Большое внимание уделяется шагу и ширине.

Специальные

Отдельным видом цепей для бензопил являются твердосплавные, специального назначения. К таким относятся цепи для резки бетона, газобетона или аварийно-спасательных работ. Конструкция зуба в такой гарнитуре включает в себя победитовую напайку, которая и позволяет пилить бетон, тонкий металл, арматуру, стекло.

Стоят подобные цепи очень дорого. Рядовому пользователю покупать их не целесообразно.

Параметры пильной цепи

Цепи для бензопил принято разделять по следующим параметрам:

1. Шаг или расстояние между соседними тремя заклепками.
2. Ширина посадочного звена.
3. Количество звеньев.
4. Вид режущих зубьев.

Параметры гарнитуры сочетают в себе различные комбинации, от чего зависят конечные результаты, качество и скорость реза.

Например, гарнитура может иметь такие параметры: шаг 3/8, длину 52 звена, ширину паза 1,3 мм, вид режущего зуба чиппер. Опытный специалист, оценив данные, скажет, что она предназначена для продольного реза и имеет средние показатели производительности и отдачи. Цепи такого типа могут устанавливаться на бензопилы бытового назначения, т.к. они более универсальные.

Давайте разберемся, почему он делает такие выводы.

1. Шаг цепи 3/8. Такой шаг может применяться на бензопилах средней и низкой мощности. На сегодняшний день это самый популярный вариант шага. Подробнее о шаге цепи и его видах вы можете почитать в статье посвященной этому параметру, перейдя по ссылке.
2. Второе, это форма зуба. Чиппер – в переводе с английского означает рубить в щепки. Такая форма имеет большую площадь рабочей кромки, за счет чего не режет, а разрубает волокна древесины. Применяются в основном для продольного реза, или поперечного, но на бытовых бензопилах, где скорость и качество особой роли не играет. Чизельные цепи режут лучше и быстрее поперек. Для продольного реза они не используются. Чизель в переводе резец, долото. Кромки такого зуба очень острые и тонкие, сама форма отличается агрессивными углами. Использовать чизельные цепи для продольного или фигурного реза не рекомендуется, к тому же они имеют высокую отдачу, т.к. врезаются в древесину быстрее и эффективнее.
3. Длина 52 звена, говорит о том, что эта цепь устанавливается на 14-дюймовую шину (35 см). Их ставят на бензопилы бытового назначения.

И последнее, что дает основание отнести гарнитуру к среднему классу производительности, это ширина посадочного паза. В основном встречается три варианта ширины, это: 1,1 мм, 1,3 и 1,5.

Ширина паза прямо пропорциональна ширине пропила и зависит от размеров зуба. Чем ширина паза больше, тем шире рез и наоборот. Цепи с минимальным показателем ширины отличаются низкой отдачей и скоростью реза. В основном, такие устанавливаются на бензиновых высоторезах и цепных пилах малой мощности.

Гарнитура с посадочным 1,3 мм может устанавливаться как на бытовых, так и на полупрофессиональных и профессиональных бензопилах, шаг цепи при этом может быть разный.

Ширина 1,5 мм ранее применялась только на цепях для профессионального использования. В последнее время, в связи с тем, что рынок заполонили мощные и доступные бензопилы китайского производства, такие цепи стали использоваться и на них.

Ширина 1,6 мм и 2 мм. применяется исключительно на профессиональных и промышленных пилах.

Какая лучше

С параметрами разобрались, теперь посмотрим, какая цепь для бензопилы лучше и почему. Вопрос этот актуальный, т.к. всем хочется использовать только самое лучшее, но по каким критериям определить какая цепь лучше, а какая хуже. Лучше, значит быстрее, или лучше – безопаснее?

У всех видов есть как преимущества, так и недостатки. Например, чизельная с размером посадочного 1,5 мм и шагом 0,404 дюйма, самая опасная. У нее высокая отдача, её тяжело контролировать, но в тоже время, она отличается от других лучшими показателями скорости реза и производительности.

Мы думаем, что решать какая цепь для бензопилы лучше, а какая хуже, должен потребитель, основываясь на свой опыт. Мы можем только рассказать о фактах.

Как подобрать

Вопрос подбора актуален для малоопытных пользователей. Профессионалы знают о гарнитуре практически все и умеют выбирать то, что им нужно. По этой причине, наши советы будут ориентированы именно на любителей, а не на профи. Итак, приступим.

Для того чтобы правильно выбрать нужно:

1. Знать характеристики бензопилы, а именно шаг и длину шины. Опираться на название и модель бензопилы при выборе не стоит, т.к. на одну бензопилу могут устанавливаться шины различной длины и ширины посадочного звена.
2. Заранее определиться с объемом и видом работ, для которых планируется её использовать. Если пилить поперек, то выбираем чизельные, вдоль – чипперные.

Важно! Затачивать под продольный рез (10⁰) придется самостоятельно или в сервисном центре. Гарнитура, заточенная для продольного реза, в продаже встречается редко.

Отдельно нужно упомянуть о выборе гарнитуры Штиль. Если вы планируете купить цепь этого производителя (они на сегодняшний день считаются самыми качественными), то для выбора лучше воспользоваться специальной формой поиска, которую можно найти на сайте компании.

Введя в форму поиска данные бензопилы, программа автоматически выберет и предложит вам подходящие варианты. Сервис удобный, но имеет один большой минус, подбор ведется только по моделям бензопил Штиль. Для того чтобы подобрать цепь для пил других брендов, придется вооружиться каталогом.

Тест-драйв цепей

Представляем вашему вниманию интересное видео, автор которого показывает производительность цепей разных брендов: Husqvarna, Stihl,  Oregon и другие.

Как посчитать звенья

Многие пользователи не знают, как правильно посчитать количество звеньев цепи, хотя делается это достаточно просто. Считать лучше по хвостовикам. Для того чтобы не сбиться при подсчете, хвостовик с которого начинаете считать, нужно пометить. Сделать это можно маркером или приклеив на него бумажку.

Второй вариант подсчета — считать количество соединительных звеньев. Быстрее считать парно, для этого цепь нужно размотать, сложить пополам и разложить на ровной поверхности, например, на столе.

Важно! При подсчете не критично ошибиться на одно звено в большую сторону. Если недосчитаться одного звена, то при выборе и покупке запасной цепи можно сделать ошибку и приобрести короткую цепь, установить которую на бензопилу будет невозможно.

Как узнать какая гарнитура на бензопиле

Определить тип цепи, которая установлена на бензопиле, можно несколькими способами. Если пила новая, только купленная, то тип и размер цепи указываются в документах (руководстве пользователя, в разделе характеристики). Если пила уже успела поработать и не известно, менялась ли гарнитура за время эксплуатации, то определить тип цепи можно проведя следующие действия:

1. Снять гарнитуру и посчитать количество звеньев.
2. При помощи штангенциркуля померить ширину хвостовика.
3. Визуально определить тип режущего зуба. Острые боковые грани — чизельный, плавные грани — чипперный.
4. Линейкой или штангенциркулем померить шаг цепи.

Важно! Неправильно снятые размеры могут привести к тому, что новая цепь не установится в шину бензопилы или будет иметь шаг отличный от шага звездочек, поэтому при проведении замеров нужно быть более внимательным.

Еще один вариант определить размеры, который не требует использования измерительного инструмента — это посмотреть маркировку. Ширина хвостовика указывается с наружной стороны зубца ограничителя. Значения ширины на зубце показано без единицы, т.е. если на зубце стоит цифра 3, то ширина хвостовика 1,3 мм, остальные размеры аналогично.

Некоторые производители, например, Орегон, на хвостовик своей продукции наносят номер модели. Зная номер, можно без труда определить характеристики цепи, найдя информацию о модели в каталоге.

Заключение

Мы рассмотрели виды и особенности гарнитуры для бензопилы, рассказали, как можно посчитать количество звеньев и определить, какая цепь установлена. Если у вас остались вопросы или вы желаете что-то уточнить, пишите в комментарии, мы обязательно ответим.

Как правильно пользоваться и обслуживать бензопилу Stihl MS 180

Stihl MS 180 — одна из наиболее популярных и бюджетных бензопил немецкого качества бренда Stihl. Как и любая бензиновая техника, эта пила нуждается в периодическом техобслуживании. Которое рекомендовано проводить в авторизованном Сервисном центре. Тем, кто впервые пользуется (мото) бензопилой, будет полезно узнать, как правильно подготовить топливную смесь и как запускать двигатель. И, конечно, нужно научиться отличать оригинальную Stihl MS 180 от подделки.

Как завести Stihl MS 180

• Зажать кнопку газа и перевести рычаг управления заслонкой в самое нижнее положение
• Несколько раз дернуть ручку стартера до первой вспышки (когда пила запускается и тут же глохнет), а рычаг управления заслонкой перевести на одно положение вверх.
• Снова тянуть ручку стартера, пока пила не запустится.
• Один раз нажать и отпустить кнопку газа.

Как подготовить топливную смесь для Stihl MS 180

От качества топливной смеси, состоящей из моторного масла и бензина, зависит срок службы и производительность двигателя любого бензоинструмента, в том числе цепной пилы. После покупки MS 180 многие интересуются, какой бензин подходит для этой модели. Производитель рекомендует использовать бензин с октановым числом не ниже 90. Поэтому инструмент можно заправить бензином АИ-92. При этом опытные пользователи не рекомендуют применять АИ-95, поскольку на отечественных АЗС топливо этой марки нередко содержит вредные для моторов садовой бензотехники присадки. Рекомендуемая пропорция масла к бензину 1:50, т.е. на 1л. Бензина 20мл. мала. Масло рекомендуется только фирменное для 2-х тактных двигателей.

Какую цепь установить на Stihl MS 180

Чтобы мотопила эффективно распиливала древесину, а двигатель не испытывал перегрузок, нужно правильно подобрать гарнитуру, в частности, цепь. Так, MS 180 совместима с цепями с шагом ⅜ дюйма и толщиной ведущего звена в 1,3 мм или 1,1 мм, если используется шина с соответствующими пазами. Нужно обратить внимание и на длину шины — если она составляет 35 см, подойдет цепь с 50 звеньями, если 40 см — с 55 звеньями.

Затем следует определиться с брендом пильной гарнитуры. Поскольку MS 180 — одна из наиболее популярных моделей, на рынке можно встретить множество предложений, но далеко не все из них являются качественными. Поэтому лучше приобрести оригинальные цепи от Stihl, например:

Качественную пильную гарнитуру, совместимую в том числе с MS 180, выпускает также американский производитель Oregon. Например, для продолжительных работ подойдет цепь Oregon 91vxl050ER.

Как отличить подделку Stihl MS 180

Благодаря своим характеристикам эта мотопила полюбилась многим российским пользователям, чем и пользуются некоторые недобросовестные продавцы. Чтобы быть уверенным в подлинности бензопилы, приобретать ее следует только в фирменном магазине. Если же нет такой возможности или хочется сэкономить, многие отправляются на рынок либо приобретают инструмент “с рук”. Однако такая покупка может быстро разочаровать своей ненадежностью. Чтобы отличить поддельную MS 180, нужно обратить внимание на следующие детали:

• Серийный номер на глушителе. У поддельных моделей на глушителе не выгравирован серийный номер.
• Крышка бака. У поддельного устройства крышка топливного бака ничем не закреплена.
• Свеча зажигания и ее колпачок. В оригинальных моделях применяются свечи марок NGK (Япония) и Bosch (Германия), а прикрываются они матовыми колпачками. Подделки же оснащаются свечами других производителей и глянцевыми колпачками.

Техническое обслуживание

Контроль фильтров/замена.

• Чистый и целый фильтр обеспечивает необходимое для горения количества воздуха и защищает при этом мотор от попадания в него грязи.

Очистка ребер цилиндра.

• Обеспечивает необходимое охлаждение двигателя, поддерживая рабочий температурный режим.

Контроль фиксации крепления глушителя.

• Надежное крепление глушителя обеспечивает более долгий срок службы агрегата.

Контроль свечи зажигания.

• Рекомендованная свеча зажигания с соответствующим зазором способствует лучшему сгоранию топлива.

Проверка элементов управления.

• Исправное состояние элементов управления агрегатом обеспечивает простую и безопасную эксплуатацию агрегатов.

Проверка режущей гарнитуры и заточка цепи.

• Регулярная проверка и заточка позволяет повысить производительность пиления и уменьшает нагрузку на двигатель.

Заправка масляного бака.

• Применение оригинального цепного масла повышает ресурс режущей гарнитуры в несколько раз.

Запуск пилы и контроль оборотов.

• Правильные настройки агрегата обеспечивают максимальную производительность при пилении.

ДВА РАЗА В ГОД ПРОВОДИТСЯ «АКЦИЯ» БЕСПЛАТНОЕ ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБСЛУЖИВАНИЕ: АПРЕЛЬ И ОКТЯБРЬ.

Пильные шины Stihl — 100 ПИЛ

Как подобрать пильную шину к пиле STIHL.

Как минимум, Шина должна подходить к пиле по основным параметрам. А именно:

1. Шина обязательно должна иметь подходящий для конкретной модели пилы хвостовик. Компания Штиль выпускает пилы, к которым подходят шины со следующими хвостовиками:

— арт. 3005 ххх хххх – шины для всех пил MS 170-251 и MSE 140-230. Хвостовик А074 по классификации OREGON.

— арт. 3003 ххх хххх – шины для всех пил MS 260-661 и MSE 250. Хвостовик D025 по классификации OREGON.

— арт. 3002 ххх хххх – шины для MS 880. Хвостовик Е031 по классификации OREGON.

2. Шаг цепи, которая устанавливается на шину, должен соответствовать шагу ведущей звездочки, установленной на пилу и шагу цепи. Варианты – 1/4”, 3/8”низкий профиль, 0,325”, 3/8”, 0,404”.

3. Длину шины с соответствующими параметрами выбираем из рекомендованного диапазона для конкретной модели пилы. Т.е. нельзя использовать шину длиной 50см/20” для модели MS 180.

Итого, форма хвостовика шины параметр обязательный. Шаг шины обязательно должен соответствовать шагу цепи и ведущей звездочки пилы (можно менять, но все сразу). Длина шины должна соответствовать длине цепи.

Компания Штиль выпускает несколько типов шин, основные параметры которых идентичны. Шины разного назначения, сделаны по разным технологиям и различающиеся по эксплуатационным характеристикам. Основные варианты исполнения:

— Carving E. Специальный тип шин с очень узким наконечником. Цельнофрезерованная. Для фигурного выпиливания.

— Rollomatic E Standart. Стандартная сварная шина с встроенной ведомой звездочкой. Оптимальное соотношение цена/качество.

— Rollomatic E Super. Цельнофрезерованная шина со сменным наконечником. Для профессионального применения.

— Duromatic E. Цельнофрезерованная шина с твердосплавным наконечником. Для особо тяжелых работ.

— Rollomatic E Mini. Сварная шина с узким (1,1мм) пазом для особо малых пил.

* Варианты исполнения с приставкой Light говорят о том, что такие шины особо легкие. По остальным параметрам соответствуют шинам соответствующей группы.

На сайте шины STIHL сгруппированы по типам исполнения. Выбирайте нужный Вам тип, нажимайте «ПОДРОБНЕЕ» и выбирайте шину с необходимыми основными параметрами. Затрудняетесь – пишите, звоните, приезжайте. Поможем обязательно.

Какую бензопилу выбрать

Сравнение самых популярных моделей бензиновых пил от Husqvarna, STIHL и ECHO. 

Популярные бензиновые пилы любительского класса Husqvarna 240, Stihl 180 и ECHO CS-353 ES являются представителями известных мировых брендов европейского и японского происхождения. Husqvarna является шведской маркой, имеющей заводы в Европе и в Китае. Техника под брендом Stihl производится в Германии и Китае. Относительно новый японский бренд Echo производит свою продукцию в основном в Японии, но так же имеются предприятия в Китае. Поэтому, если для вас принципиальна страна-производитель приобретаемой техники, имейте в виду, что она может быть произведена как в стране – родине бренда, так и в Китае. Однако, стоит заметить, что крупные современные производители техники с хорошей репутацией отлично следят за качеством сборки и производством комплектующих независимо от того, в какой стране располагается производящее предприятие. Поэтому тому, в какой стране произведена техника известного бренда, сегодня не стоит придавать решающее значение.

В данной обзорной статье будут рассмотрены различные эксплуатационные характеристики и важные дополнительные опции бензиновых пил Husqvarna 240, Stihl 180, ECHO CS-353 ES для того, чтобы пользователю было проще определиться с выбором подходящей модели.

Дольше всех из этих моделей выпускается Stihl 180. Уже в течение многих лет она имеет огромную популярность на рынке и продолжает выпускаться практически без изменений. Однако, выпускающиеся сегодня пилы Stihl 180 можно по желанию пользователя дополнительно оснастить некоторыми опциями для повышения удобства работы. Самой «молодой» из этих моделей является ECHO CS-353 ES, имеющая, как следствие, более современный дизайн и некоторые эргономичные конструктивные решения, которых нет у более старых моделей.

Рабочие характеристики у всех трех моделей достаточно близки. Мощность цепных бензопил Husqvarna 240 и Stihl 180 составляет 2 л.с. (1,5 кВт), а у пилы ECHO CS-353 ES этот показатель на 10% выше – 2,2 л.с. (1,59 кВт). Силовым элементом каждой из этих пил служит одноцилиндровый двухтактный двигатель, который необходимо заправлять топливной смесью бензина марки Аи-92 и масла для двухтактных двигателей в соотношении 50:1. При этом объем двигателей у этих моделей пусть незначительно, но отличается. Для пилы Husqvarna 240 он составляет 38,2 куб.см, для Stihl 180 – 31,8 куб.см, для ECHO CS-353 ES – 34 куб.см. Топливные баки имеют схожий объем: 0,25 л для Stihl 180 и ECHO CS-353 ES и 0,3 л для Husqvarna 240. Одного полного топливного бака хватит на 30-40 минут автономной работы в зависимости от сложности выполняемой работы. Можно отметить, что у модели Stihl 180 единственной из обсуждаемых имеется прозрачное окошечко для визуального контроля уровня топлива и масла, что очень удобно во время работы.

Запуск двигателя у каждой модели имеет свои нюансы. Бензиновая цепная пила ECHO CS-353 ES оснащена топливоподкачивающим насосом, эргономично расположенным в удобном доступе для свободной руки оператора, что позволяет быстрее осуществить запуск и снижает риск залить свечку для неопытного пользователя. Система Easy Start, также имеющаяся на этой модели, представляет собой специальную пружину, делающую рывок при ручном запуске более плавным и комфортным для оператора. Также бензопила ECHO CS-353 ES защищена от возможного обледенения карбюратора в холодное время года специальной заслонкой, которая переставляется в нужное положение в «зимнем» или «летнем» режиме работы. Цепная бензопила Husqvarna 240 также комплектуется топливоподкачивающим насосом, что делает запуск более быстрым и удобным. У стартера здесь также имеется длинная пружина, что уменьшает сопротивление для руки при запуске. Однако, здесь не предусмотрено различие в запуске для холодного и теплого времен года. Бензиновая пила Stihl 180 имеет самую простую стандартную комплектацию для запуска. Здесь нет ни топливоподкачивающего насоса, ни демпфирующего элемента для облегчения усилий при запуске. Это может создать определенные трудности для начинающих и неопытных пользователей, высока вероятность залить топливной смесью свечу зажигания при старте. В качестве дополнительной опции данную модель можно оснастить системой ElastoStart, аналогом системы EasyStart у пилы ECHO CS-353 ES.

Все эти модели подходят для решения различных бытовых задач: заготовки дров, нарезки пиломатериалов, валки деревьев диаметром до 30 см. Поэтому они имеют схожие по параметрам пильные шины и цепи. Цепная бензиновая пила Husqvarna 240 поставляется в комплекте с пильной шиной длиной 40 см (16 дюймов) и двумя цепями. Шаг цепи составляет 3/8 дюйма, количество звеньев в цепи – 56. Пильная шина бензопилы Stihl 180 может иметь длину 35 см (14 дюймов) или 40 см (16 дюймов) в зависимости от комплектации, которую выберет пользователь. В соответствии с длиной пильной шины цепь будет иметь 50 или 55 звеньев и шаг цепи 3/8 дюйма. Пила японского бренда ECHO имеет пильную шину длиной 35 см (14 дюймов) и 52 звена в цепи с шагом 3/8 дюйма.

Воздушные фильтры цепных бензопил Husqvarna 240, Stihl 180 и ECHO CS-353 ES изготовлены из разных материалов, имеют различную форму и срок службы. На моделях Husqvarna 240 и ECHO CS-353 ES установлены многоразовые фильтры из современного пластика и нейлона. Эти фильтры при необходимости можно самостоятельно почистить и использовать дальше. Иначе обстоит дело у пилы Stihl 180, воздушный фильтр которой изготовлен из мягкого пористого материала, не поддающегося эффективной очистке и имеющего менее длительный срок эксплуатации.

Вес бензиновых пил Husqvarna 240, Stihl 180 и ECHO CS-353 ES без режущего оборудования, топлива и смазки отличается мало: 4 кг для ECHO CS-353 ES, 3,9 кг для Stihl 180 и 4,7 кг для Husqvarna 240. При продолжительной работе с инструментом важно, чтобы его вес был оптимальным образом распределен, и пользователь мог удобно удерживать пилу, не задействуя для этого лишние усилия. Это, в конечном счете, сказывается и на продуктивности работы. Все три модели характеризуются как очень хорошо отбалансированные, что влияет на утомляемость пользователя во время работы в лучшую сторону.

Также на утомляемость пользователя влияют такие показатели, как уровень шума и вибрации. По звуковой мощности минимальное значение имеет модель Stihl 180, оно составляет 110 дБ. Для цепной бензопилы Husqvarna 240 этот показатель равен 113 дБ, а для пилы ECHO CS-353 ES – 115 дБ. С одной стороны, разница в процентном отношении несущественная, но с другой – она действительно ощущается при сравнении этих моделей во время работы. Каждая из этих моделей оснащена эффективной антивибрационной системой, состоящей из пружин и эластичных резиновых демпферов. Поэтому с этой точки зрения все три производителя хорошо позаботились о пользователях.

Для безопасной работы по пилению каждая модель оснащена системой автоматического инерционного торможения при возникновении опасной непредвиденной ситуации. При нажатии на передний упор движение цепи останавливается.

То, как осуществляется регулировка натяжения цепи, также является важным аспектом безопасной и комфортной эксплуатации цепной бензопилы. Наиболее удобной системой регулировки натяжения в стандартной комплектации оснащена пила ECHO CS-353 ES. Доступ к цепной звездочке осуществляется сбоку, что исключает риск поранить руки о звенья цепи. У моделей Husqvarna 240 и Stihl 180 расположение натяжителя цепи фронтальное, что является менее удобным. Однако, производитель пилы Stihl 180 предлагает опционально оснастить инструмент возможностью бокового доступа к натяжителю и даже опцией безинструментальной регулировки натяжения цепи. Поэтому, если установить это дополнение на бензопилу Stihl 180, она будет лидировать по удобству доступа к натяжителю цепи среди всех трех моделей.

Что касается технического обслуживания и удобства самостоятельного доступа к внутренним частям для чистки и замены, то здесь лидирует модель японского бренда ECHO CS-353 ES. Крышка практически без усилий снимается без применения дополнительных инструментов благодаря специальным защелкам. Это особенно удобно для работы вдали от дома или мастерской. Чтобы снять крышку, например, с бензопилы Husqvarna 240, потребуется использовать отвертку, которая не всегда имеется под рукой.

В нашей стране не возникает проблем с сервисным техническим обслуживанием и ремонтом ни одной из этих бензопил, поскольку сервисные центры каждого из представленных брендов имеются в любом крупном городе. Также нет недостатка в комплектующих для обсуждаемых моделей, и при необходимости можно без труда приобрести все нужные детали и запчасти.

Сколько якорной цепи? — Yachting Monthly

Когда дело доходит до установки якорной цепи, большинство из нас следует основному эмпирическому правилу, но мы должны учитывать ветер и прилив, — утверждает Кристофер Смит

.

Якорная стоянка — ключевая часть арсенала круизного моряка — по крайней мере, для тех, кто не намерен укрываться в гавани каждый раз, когда они хотят прекратить плавание.

Однако для такого жизненно важного аспекта нашего времяпрепровождения может быть трудно получить достоверную информацию по многим аспектам процесса.

Это связано, в немалой степени, со сложностями в решении таких вопросов, как длина цепи.

В большинстве случаев требуется удобное практическое правило, которое можно использовать для обеспечения безопасной постановки на якорь в большинстве случаев.

По самой своей природе эмпирическое вычисление не может учесть все аспекты уравнения привязки, но удивительно, как многие упускают из виду весьма важные соображения просто потому, что их может быть трудно согласовать с определенной упрощенной формулой.

Ветер

У каждого свое представление о том, сколько использовать якорную цепь. Самый простой — и, возможно, наиболее часто используемый метод — зачем оставлять всю цепочку, которую вы сохранили, в шкафчике?

На самом деле это обычно означает использование максимальной безопасной длины — на любой якорной стоянке есть камни, мелководье и другие лодки на якоре либо когда вы прибываете, либо, часто, появляются после вашего прибытия.

Так как же решить, что безопасно, прежде чем искать где-нибудь якорь? Традиционно вы используете прицел — кратную глубине воды, чтобы определить длину якорной цепи, которую вам нужно будет использовать.RYA предлагает прицел как минимум 4: 1, другие говорят, что вам нужно 7: 1, но в переполненных якорных стоянках 3: 1 — довольно распространенное явление.

Однако мгновенная мысль подсказывает вам, что статическое практическое правило в среде, которая может значительно меняться в различных условиях, недостаточно учитывает основные силы, действующие на вашу лодку, а именно ветер и приливное течение.

Часто ветер является самой большой проблемой, поэтому вы должны принять это во внимание, а также знать и быть готовыми к максимальной ожидаемой силе ветра.И вот в чем проблема; практически нет статей или учебников по якорению, в которых рассказывалось бы, как учитывать силу ветра при установке якоря.

Итак, я придумал очень простое руководство, чтобы предоставить эмпирическое правило (см. Выше), которое также учитывает ветер и приливы.

Если вы не увидите ничего больше, чем максимальное значение Force 4 (16 узлов), и вы ставите на якорь 10-метровую яхту на довольно мелкой воде, я имею в виду все, что находится на глубине примерно 8 метров, у вас должно быть хорошо с 16 м + 10 м = 26м цепи.Но если вы думаете, что приближается шторм силы 7 (33 узла), попробуйте установить 33 м + 10 м = 43 м цепи. Это практическое правило работает на большинстве якорных стоянок относительно близко к берегу, где вода довольно мелкая, но для более глубоких якорных стоянок (около 10-15 м) вам, очевидно, понадобится больше цепи.

Ответ прост: вам просто нужно использовать коэффициент, в 1,5 раза превышающий скорость ветра, что даст лучший результат.

Формула ТОЛЬКО для ветра для мелких якорных стоянок (от 4 до 8 м) Необходимая цепь (м) = скорость ветра (узлы) + длина лодки (м)

Расчет длины: практическое правило

1. Простое уравнение Самое основное уравнение: скорость ветра + длина лодки = длина цепи.Это работает для якорных стоянок до 10 м. При превышении этой глубины рассчитайте скорость ветра в 1,5 раза больше.
2. Расчет прилива Прилив также можно учесть, преобразовав приливную силу, передаваемую вашей лодке, в относительную скорость ветра. Двигаясь при переменном встречном ветре и отмечая обороты двигателя, а затем наблюдая, какую скорость лодки обеспечивают те же обороты в спокойных условиях, можно обеспечить удивительно точное преобразование скорости ветра в приливный поток.
3. Добавление еще Разумно добавить примерно одну дополнительную длину лодки к нашим расчетам, чтобы обеспечить достаточный запас хода для противодействия рысканию на якоре без прямого восходящего тягового усилия за якорь.
4. Планируйте заранее Убедитесь, что вы учитываете не только условия стоянки по прибытии, но и то, какими они могут стать. Прогнозируется ли значительное усиление ветра? Есть ли вероятность того, что якорная стоянка станет значительно загруженной, пока вы там будете? Как вы ожидаете, какой приливный поток пройдет через якорную стоянку при изменении прилива?

Различные типы анкеров за и против

Рыбак

Традиционные рыболовные якоря можно сложить, чтобы их было легче ставить, и они хорошо держатся на камнях и водорослях, но крошечные гребешки, вероятно, будут тянуться за любое другое дно, исключая их использование в качестве основного якоря.

Плуг

Якоря

CQR, Delta и Kobra II могут затягиваться при достаточно сильном натяжении, вспахивая морское дно, если это мягкий песок или ил. Разработаны конструкции, позволяющие увеличить их максимальную удерживающую способность.

Коготь

Настоящий Брюс не производился очень много лет, и было выпущено много копий, часто из низкосортных, хрупких и непрочных материалов. Оригинальный предмет устанавливает
и хорошо держится на дне от мягкого до среднего, как говорят, держится на камнях, но его длинная передняя кромка изо всех сил пытается прорезать сорняк.

Плоский анкер

Якоря Danforth, Britany, FOB, Fortress и Guardian имеют большую площадь поверхности для своего веса и хорошо держатся на дне от мягкого до среднего. На твердом дне, таком как утрамбованный песок и галька, они могут скользить без усадки, и они, как правило, не сбрасываются, когда прилив или ветер меняют направление тяги.

Новое поколение

В эту категорию входят Bügel, Manson Supreme, Rocna, Sarca и Spade.Их конструкция призвана упростить их установку и сброс при изменении прилива с увеличенной удерживающей способностью.

Кривые цепи

Отправной точкой для этих расчетов является кривизна цепи в воде, контактной сети, которая передает поперечную силу с лодки на морское дно. Математика не увлекательна, но для типичных условий постановки на якорь длина цепной линии оказывается тесно линейной со скоростью ветра, но с наклоном, который увеличивается только как квадратный корень из глубины крепления.

Для мелкой постановки на якорь (5-8 м) уклон близок к единице: длина цепной линии (м) = скорость ветра (узлы). При более глубоких якорных стоянках (15 м) уклон повышается до 1,5 и далее до 2 на глубине 20 м.

Коэффициент квадратного корня с глубиной ясно показывает, что концепция области видимости ошибочна. Например, для постановки на якорь на глубине 4 м при наличии или ожидаемом ветре силой 5 баллов вам понадобится цепь длиной 32 м, прицел почти 8: 1.

Количество якорных цепей, которые вы используете в спокойных условиях, должно отличаться от количества, необходимого при сильном ветре

Как говорит Род Хейкелл ( Yachting Monthly , лето 2018) «Забудьте о прицеле 3: 1, который обычно рекламируют: выберите как минимум 5: 1, а если у вас есть качающееся пространство, то больше.’

Я говорю, что забудьте полностью о концепции объема!

Сила ветра также зависит от формы (парусности) лодки. Вы можете измерить это на своей лодке, измерив количество цепи, поднятой при заданной скорости ветра (V) и глубине (D), по формуле: catenary = f.V.√D.

Мой расчет «неглубоких якорных стоянок» основан на моей лодке (10,4 м Jeanneau Espace, цепь 10 мм) и глубине 6 м. Значения будут примерно одинаковыми для большинства серийных яхт, если предположить, что размер цепи увеличивается в соответствии с размером лодки.

Цепь на морском дне

Мы можем рассчитать длину контактной сети — но правильное ли это количество якорной цепи для использования?

Кристофер Смит владел долями в Греции.

Годы плавания, чтобы посмотреть на якорь в теплых водах Средиземного моря, убедили меня в том, что оптимальная длина цепи — это контактная линия плюс длина лодки.

Это дает буфер для противодействия рысканию на якоре без прямого подъема якоря вверх.

Также длина цепи, уложенной в песок или грязь, существенно снижает тяговое усилие на якорь. Итак, мое лучшее предположение: общая цепь = контактная линия + длина лодки.

Некоторые говорят, что для того, чтобы якорь забился на морское дно, цепь должна быть наклонена вверх, то есть на длину немного меньше, чем у контактной сети. Однако именно поэтому мы используем двигатель в обратном направлении после закрепления — чтобы поднять угол цепи и опустить якорь.

Удерживающая сила якоря здесь не учитывается.Это важно и обсуждается во многих других статьях.

Приливные течения

Вторая сила, действующая на вашу лодку, — это сопротивление приливных течений. Удивительно, но вы легко можете измерить это самостоятельно.

В ветреный день мотор медленно противостоит ветру, уменьшите обороты и найдите обороты двигателя, которые просто уравновешивают силу ветра. Затем в безветренный день обратите внимание на скорость лодки при тех же оборотах.

С моей лодкой при ветре с полной силой 4 требовалось 1200 об / мин, чтобы уравновесить силу ветра, а при штиле 1200 об / мин давали 4.Скорость 2 узла по земле. Таким образом, приливное течение 4,2 узла будет соответствовать силе ветра 16 узлов, для балансировки которой требуется цепь длиной 16 м, то есть около 4 м цепи на узел течения.

Итак, теперь у нас есть более полная формула.

Якорные цепи обычно маркируются шагами по 10 м, поэтому на практике можно округлить расчеты до ближайших 10 м цепи.

С добавлением длины лодки 10 м это дает простую в использовании таблицу (ниже).

Кажется необычным, что во всех статьях о якорении и обсуждениях прицела так мало внимания уделяется тому, как учесть силу ветра.

Да, есть статьи для компьютерных фанатов о длине цепной связи, но мало попыток применить это в парусной практике. Я надеюсь здесь, по крайней мере, пробудить ваши мысли о том, как выбрать подходящую длину якорной цепи.

В конце концов, это не так уж и сложно.

Формула ветра и прилива для мелких якорных стоянок (от 4 до 8 м) Необходимая цепь (м) = скорость ветра (узлы) + 4 x скорость относительно воды + длина лодки (м)

Вам понравилось это читать?

Подписка на ежемесячный журнал Yachting стоит примерно на 40% меньше, чем обложка .

Печатные и цифровые издания доступны через Magazines Direct — где вы также можете найти последние предложения .

YM содержит информацию, которая поможет вам максимально эффективно провести время на воде.

• Поднимите свое морское дело на новый уровень с советами, советами и навыками от наших экспертов
• Беспристрастные подробные обзоры новейших яхт и оборудования
• Круизные гиды, которые помогут вам добраться до места вашей мечты

Следуйте за нами на Facebook , Twitter и Instagram.

Взаимодействия CALM на ранних стадиях CME.

Контекст 1

… первая стадия CME — инициирование, за которым следует формирование ямы, покрытой клатрином, и выбор груза [1,2] (Рисунок 1). Точный механизм инициирования CME еще полностью не изучен [6], хотя ключевые компоненты хорошо известны. …

Context 2

… Взаимодействие клатрина и адаптерных белков на ранних стадиях CME показано на рисунке 1.CALM и комплекс адаптерных белков 2 (AP2) накапливаются в сайтах обогащенных PtdIns (4,5) P2 посредством связывания определенных основных последовательностей. …

Контекст 3

… связывает груз-получатель. Домен N-концевой гомологии (ANTH) CALM AP180 (представленный кристаллической структурой из записи 3ZYK в банке данных белков на рисунке 1) связывает растворимый NSF (чувствительный к N-этилмалеимиду гибридный белок) домен рецептора белка прикрепления (SNARE) ассоциированного с везикулами мембранные белки (ВАМП) [10,11].Фенотип нокаута / истощения CALM предполагает, что он играет роль в упорядочении и сужении клатриновой клетки [12] [13] [14] [15]. …

Контекст 4

… фенотип нокаута / истощения CALM предполагает, что он играет роль в упорядочении и сужении клатриновой клетки [12] [13] [14] [15]. Взаимодействия и роль AP180 в CME по существу такие же, как у CALM на рисунке 1, за исключением того, что AP180 имеет более длинную неупорядоченную цепь с большим количеством клатринсвязывающих мотивов, которые могут быть ответственны за образование более мелких покрытых клатрином везикул….

Контекст 5

… повсеместный адаптерный белковый комплекс 2 (AP2) представляет собой гетеротетрамер четырех субъединиц (α, β2, µ2 и σ2 [16]) и специфичен для CME в PM. AP2 связывается с PtdIns (4,5) P2 через сайты связывания на субъединицах α и µ2 [17] и способен рекрутировать трискелии клатрина через субъединицу β2 и управлять сборкой клатрина [9,18,19] (Рисунок 1). Обе субъединицы α и β2 могут связывать клатрин, но также и широкий спектр адаптерных и вспомогательных белков, например, CALM и AP180, субстрат рецептора эпидермального фактора роста 15 (eps15), эпсины, амфифизины и интерсектины [8,20,21]….

Context 6

… другими основными адапторными белками являются CALM и AP180, которые в равной степени распространены с AP2 в CCV (в CME и SVE, соответственно) в соотношении одна молекула адаптера на трискелион клатрина [ 25,26], но их часто упускают из виду при детальном изучении их роли в CME / SVE. CALM и AP180 представляют собой мономерные адаптерные белки, которые связываются с PM через свой N-концевой домен ANTH [27] и связывают клатрин и AP2 через неструктурированный C-концевой домен сборки (AD) [28] (Figures 1 and 2).Многие другие менее распространенные мономерные адаптеры имеют сходную доменную структуру, которая делает возможным связывание липидов, клатрина, груза и дополнительных белков [29]. …

(PDF) Сравнение и исследования чувствительности системы швартовки типов CALM и SALM для преобразователей энергии волн

J. Mar. Sci. Англ. 2014, 2 122

4. Kirrane, P .; Fabricius, P .; Морван, Р. Разработка эффективных методов проектирования для оптимизации систем швартовки

для массивов волновой энергии; Морской институт: Голуэй,

Ирландия, 2011.

5. Harris, R.E .; Johanning, L .; Вольфрам, Дж. Системы швартовки для преобразователей волновой энергии:

Обзор вопросов проектирования и вариантов. В материалах 3-й Международной конференции по морскому судоходству

Возобновляемая энергия, Эдинбург, Великобритания, 7–9 июля 2004 г.

6. Рекомендации по проектированию и эксплуатации волновых преобразователей энергии; Det Norske Veritas: Høvik,

Norway, 2005.

7. Synodis, S.T .; Флори, Дж. Ф. Шестилетний опыт работы с одноякорной швартовкой BREGA.In

Proceeding of Offshore Technology Conference, Хьюстон, Техас, США, 2–5 мая 1977 г.

8. Faltinsen, O.M. Морские нагрузки на суда и морские сооружения; Издательство Кембриджского университета:

Кембридж, Великобритания, 1990.

9. Проектирование океанских систем. Доступно в Интернете: http://ocw.mit.edu/courses/mechanical-engineering/

2-019-design-of-ocean-systems-spring-2011 (по состоянию на 1 ноября 2013 г.).

10. Pecher, A .; Kofoed, J.P .; Ларсен, Т.Технические характеристики преобразователя энергии Hanstholm WEPTOS Wave

. Энергия 2012, 5, 1001–1017.

11. Parmeggiani, S .; Kofoed, J .; Фриис-Мадсен, Э. Экспериментальное исследование, связанное с проектом швартовки

для демонстрационной установки Wave Dragon WEC мощностью 1,5 МВт в компании DanWEC. Энергия 2013, 6, 1863–1886.

12. Конспект лекций по курсу механики волн на воде. Доступно в Интернете: http://vbn.aau.dk/da/

Publications / lecture-notes-for-the-course-in-water-wave-Mechanics (69731932-7a17-47ea-b557-6

b9e0c81050f) .html (по состоянию на 1 ноября 2013 г.).

13. Wavelab 3 — Программное обеспечение для сбора и анализа данных. Доступно в Интернете: http: //www.hydrosoft.

civil.aau.dk/wavelab/ (по состоянию на 1 декабря 2013 г.).

14. Le Tirant, P .; Менье, Дж. Руководства по проектированию морских сооружений; Editions Technip:

Rueil-Malmaison, Франция, 1990.

15. Andersen, K.H .; Murff, J.D .; Randolph, M.F .; Clukey, E.C .; Erbrich, C.T .; Jostad, H.P .; Хансен,

Б.; Aubeny, C .; Sharma, P .; Супачавароте, К. Всасывающие якоря для глубоководных применений. В

Труды Международного симпозиума по границам в морской геотехнике (IS-FOG

2005), Перт, Австралия, 19–21 сентября 2005 г .; DOI: 10.1201 / NOE04153.ch2.

16. Randolph, M.F .; Гурвенек, С. Морское геотехническое проектирование; CRC Press: Бока-Ратон, Флорида,

США, 2011 г .; п. 550.

17. Supachawarote, C .; Randolph, M.F .; Гурвенек, С.Наклонная вытяжная способность всасывания

Кессоны. В материалах 14-й Международной конференции по морской и полярной инженерии, Перт,

Австралия, 23–28 мая 2004 г .; п. 500.

© 2014 Авторы; лицензиат MDPI, Базель, Швейцария. Эта статья представляет собой статью

в открытом доступе, распространяемую в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution

(http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/).

FHL2 взаимодействует с CALM и высоко экспрессируется при остром эритроидном лейкозе.

1

Rowley JD. Критическая роль хромосомных транслокаций при лейкозах человека. Annu Rev Genet 1998; 32 : 495–519.

CAS Статья Google Scholar

2

Кроликов TH. Хромосомные транслокации при раке человека. Nature 1994; 372 : 143–149.

CAS Статья Google Scholar

3

Dreyling MH, Martinez-Climent JA, Zheng M, Mao J, Rowley JD, Bohlander SK.T (10; 11) (p13; q14) в клеточной линии U937 приводит к слиянию гена AF10 и CALM, кодирующего новый член семейства белков сборки клатрина AP-3. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93 : 4804–4809.

CAS Статья Google Scholar

4

Dreyling MH, Schrader K, Fonatsch C, Schlegelberger B, Haase D, Schoch C и др. . MLL и CALM сливаются с AF10 в морфологически различных подгруппах острого лейкоза с транслокацией t (10; 11): обе перестройки связаны с плохим прогнозом. Кровь 1998; 91 : 4662–4667.

CAS PubMed Google Scholar

5

Боландер С.К., Мущинский В., Шредер К., Зиберт Р., Шлегельбергер Б., Хардер Л. и др. . Молекулярный анализ слияния CALM / AF10: идентичные перестройки у пациентов с острым миелоидным лейкозом, острым лимфобластным лейкозом и злокачественной лимфомой. Leukemia 2000; 14 : 93–99.

CAS Статья Google Scholar

6

Чаплин Т., Эйтон П., Бернард О.А., Саха В., Делла Валле В., Хиллион Дж. и др. .Новый класс генов цинкового пальца / лейциновой молнии, идентифицированный в результате молекулярного клонирования транслокации t (10; 11) при остром лейкозе. Кровь 1995; 85 : 1435–1441.

CAS PubMed Google Scholar

7

Perrin L, Bloyer S, Ferraz C, Agrawal N, Sinha P, Dura JM. Мотив лейциновой молнии гомолога Drosophila AF10 может ингибировать PRE-опосредованную репрессию: последствия для лейкемогенной активности слияний человеческого MLL-AF10. Mol Cell Biol 2003; 23 : 119–130.

CAS Статья Google Scholar

8

Greif PA, Tizazu B, Krause A, Kremmer E, Bohlander SK. Лейкемогенный слитый белок CALM / AF10 изменяет субклеточную локализацию лимфоидного регулятора Ikaros. Онкоген 2008; 27 : 2886–2896.

CAS Статья Google Scholar

9

Тебар Ф, Боландер С.К., Соркин А.Белок сборки клатрина лимфоидного миелоидного лейкоза (CALM): локализация в ямках, покрытых эндоцитами, взаимодействия с клатрином и влияние сверхэкспрессии на клатрин-опосредованный трафик. Mol Biol Cell 1999; 10 : 2687–2702.

CAS Статья Google Scholar

10

Архангело Л.Ф., Гласнер Дж., Краузе А., Боландер СК. Новый взаимодействующий CALM CATS влияет на внутриклеточную локализацию лейкемогенного слитого белка CALM / AF10. Онкоген 2006; 25 : 4099–4109.

CAS Статья Google Scholar

11

Ford MG, Pearse BM, Higgins MK, Vallis Y, Owen DJ, Gibson A и др. . Одновременное связывание PtdIns (4,5) P2 и клатрина AP180 при зарождении решеток клатрина на мембранах. Science 2001; 291 : 1051–1055.

CAS Статья Google Scholar

12

Meyerholz A, Hinrichsen L, Groos S, Esk PC, Brandes G, Ungewickell EJ.Влияние истощения белка лимфоидного миелоидного лейкоза сборки клатрина на формирование клатриновой оболочки. Трафик 2005; 6 : 1225–1234.

CAS Статья Google Scholar

13

Ким Дж.А., Ким Х.Л. Бесклеточная экспрессия и функциональное восстановление CALM в сборке клатрина. Exp Mol Med 2001; 33 : 89–94.

CAS Статья Google Scholar

14

Клебиг М.Л., Уолл МД, Поттер МД, Роу Э.Л., Карпентер Д.А., Ринчик Э.М.Мутации в гене сборки клатрина Picalm ответственны за нарушения кроветворения и метаболизма железа у мышей fit1. Proc Natl Acad Sci USA 2003; 100 : 8360–8365.

CAS Статья Google Scholar

15

Дешпанде А.Дж., Кусан М., Рават В.П., Рейтер Х., Краузе А., Потт С. и др. . Острый миелоидный лейкоз распространяется лейкозными стволовыми клетками с лимфоидными характеристиками на мышиной модели CALM / AF10-положительного лейкоза. Cancer Cell 2006; 10 : 363–374.

CAS Статья Google Scholar

16

Caudell D, Zhang Z, Chung YJ, Aplan PD. Экспрессия слитого гена CALM-AF10 приводит к сверхэкспрессии кластера Hoxa и острой лейкемии у трансгенных мышей. Cancer Res 2007; 67 : 8022–8031.

CAS Статья Google Scholar

17

Йоханнесен М., Моллер С., Хансен Т., Моэнс Ю., Ван Гелу М.Многофункциональные роли белка FHL2, состоящего только из четырех с половиной LIM. Cell Mol Life Sci 2006; 63 : 268–284.

CAS Статья Google Scholar

18

Wei Y, Renard C-A, Labalette C, Wu Y, Lévy L, Neuveut C и др. . Идентификация LIM-белка FHL2 как коактиватора β-катенина. J Biol Chem 2003; 278 : 5188–5194.

CAS Статья Google Scholar

19

Labalette C, Renard C-A, Neuveut C, Buendia M-A, Wei Y.Взаимодействие и функциональное сотрудничество между LIM-белком FHL2, CBP / p300 и {beta} -катенином. Mol Cell Biol 2004; 24 : 10689–10702.

CAS Статья Google Scholar

20

Kleiber K, Strebhardt K, Martin BT. Биологическая значимость FHL2 для опухолевых клеток и его роль в качестве предполагаемой мишени для рака. Anticancer Res 2007; 27 : 55–61.

CAS PubMed Google Scholar

21

Габриэль Б., Фишер, округ Колумбия, Орловска-Фольк М., Цур Хаузен А., Шуле Р., Мюллер Дж. М. и др. .Экспрессия транскрипционного корегулятора FHL2 при раке груди человека: клинико-патологическое исследование. J Soc Gynecol Invest 2006; 13 : 69–75.

CAS Статья Google Scholar

22

Kahl P, Gullotti L, Heukamp LC, Wolf S, Friedrichs N, Vorreuther R et al . Коактиваторы рецепторов андрогенов — лизин-специфическая гистон-деметилаза 1 и четыре с половиной домена LIM-белка 2 — предсказывают риск рецидива рака простаты. Cancer Res 2006; 66 : 11341–11347.

CAS Статья Google Scholar

23

Габриэль Б., Милденбергер С., Вайссер К. В., Мецгер Е., Гитч Г., Шуле Р. и др. . Киназа фокальной адгезии взаимодействует с коактиватором транскрипции FHL2, и оба они сверхэкспрессируются при эпителиальном раке яичников. Anticancer Res 2004; 24 : 921–927.

CAS PubMed Google Scholar

24

Ван Дж, Ян И, Ся ХХ, Гу Q, Линь М.С., Цзян Б. и др. .Подавление экспрессии FHL2 вызывает дифференцировку клеток и ингибирует канцерогенез желудка и толстой кишки. Гастроэнтерология 2007; 132 : 1066–1076.

CAS Статья Google Scholar

25

Metzeler KH, Hummel M, Bloomfield CD, Spiekermann K, Braess J, Sauerland MC и др. . Сигнатура экспрессии гена с набором 86 зондов предсказывает выживаемость при цитогенетически нормальном остром миелоидном лейкозе. Кровь 2008; 112 : 4193–4201.

CAS Статья Google Scholar

26

Джонсон Т. Байесовский метод обнаружения и картирования генов с использованием дизайна случая и контроля и объединения ДНК. Biostat 2007; 8 : 546–565.

Артикул Google Scholar

27

Ихака Р., Джентльмен Р. R: язык для анализа данных и графики. J Comput Graph Stat 1996; 5 : 299–314.

Google Scholar

28

Ливак К.Дж., Шмиттген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-Delta Delta C (T)). Методы 2001; 25 : 402–408.

CAS Статья Google Scholar

29

Rothbauer U, Zolghadr K, Muyldermans S, Schepers A, Cardoso MC, Leonhardt H. Универсальная наноловушка для биохимических и функциональных исследований с флуоресцентными гибридными белками. Mol Cell Proteomics 2008; 7 : 282–289.

CAS Статья Google Scholar

30

Müller JM, Isele U, Metzger E, Rempel A, Moser M, Pscherer A и др. . FHL2, новый тканеспецифический коактиватор рецептора андрогенов. EMBO J 2000; 19 : 359–369.

Артикул Google Scholar

31

Okada Y, Jiang Q, Lemieux M, Jeannotte L, Su L, Zhang Y.Лейкемическая трансформация с помощью CALM-AF10 включает активацию Hoxa5 с помощью hDOT1L. Nat Cell Biol 2006; 8 : 1017–1024.

CAS Статья Google Scholar

32

Окада И, Фенг Кью, Линь И, Цзян Кью, Ли И, Коффилд В.М. и др. . hDOT1L связывает метилирование гистонов с лейкемогенезом. Cell 2005; 121 : 167–178.

CAS Статья Google Scholar

33

Lange S, Auerbach D, McLoughlin P, Perriard E, Schafer BW, Perriard J-C и др. .Субклеточное нацеливание метаболических ферментов на тайтин в сердечной мышце может опосредоваться DRAL / FHL-2. J Cell Sci 2002; 115 : 4925–4936.

CAS Статья Google Scholar

34

Ng EK, Chan KK, Wong CH, Tsui SK, Ngai SM, Lee SM и др. . Взаимодействие специфического для сердца белка LIM домена, FHL2, с ДНК-связывающим ядерным белком hNP220. J Cell Biochem 2002; 84 : 556–566.

Артикул Google Scholar

35

Coghill ID, Brown S, Cottle DL, McGrath MJ, Robinson PA, Nandurkar HH et al . FHL3 представляет собой актин-связывающий белок, который регулирует опосредованное альфа-актинином связывание актина: FHL3 локализуется в актиновых стрессовых волокнах и усиливает распространение клеток и разборку стрессовых волокон. J Biol Chem 2003; 278 : 24139–24152.

CAS Статья Google Scholar

36

Кобаяси С., Сибата Х, Йокота К., Суда Н., Мураи А., Курихара И. и др. .FHL2, UBC9 и PIAS1 представляют собой новые альфа-взаимодействующие белки с рецептором эстрогена. Endocr Res 2004; 30 : 617–621.

CAS Статья Google Scholar

37

Yang Y, Hou H, Haller EM, Nicosia SV, Bai W. Подавление активности FOXO1 с помощью FHL2 посредством SIRT1-опосредованного деацетилирования. EMBO J 2005; 24 : 1021–1032.

CAS Статья Google Scholar

38

Wixler V, Geerts D, Laplantine E, Westhoff D, Smyth N, Aumailley M и др. .Белок, содержащий только LIM, DRAL / FHL2 связывается с цитоплазматическим доменом нескольких цепей альфа и бета интегринов и рекрутируется в адгезионные комплексы. J Biol Chem 2000; 275 : 33669–33678.

CAS Статья Google Scholar

39

Де Камилли П., Чен Х., Хайман Дж., Панепуччи Е., Бейтман А., Брюнгер АТ. Домен ENTH. FEBS Lett 2002; 513 : 11–18.

CAS Статья Google Scholar

40

Evans PR, Owen DJ.Эндоцитоз и перенос пузырьков. Curr Opin Struct Biol 2002; 12 : 814–821.

CAS Статья Google Scholar

41

Стахелин Р.В., Лонг Ф., Питер Б.Дж., Мюррей Д., Де Камилли П., МакМахон HT и др. . Контрастные механизмы мембранного взаимодействия доменов N-концевой гомологии AP180 (ANTH) и N-концевой гомологии эпсина (ENTH). J Biol Chem 2003; 278 : 28993–28999.

CAS Статья Google Scholar

42

Kalthoff C, Alves J, Urbanke C, Knorr R, Ungewickell EJ. Необычная структурная организация эндоцитарных белков AP180 и epsin 1. J Biol Chem 2002; 277 : 8209–8216.

CAS Статья Google Scholar

43

Samson T, Smyth N, Janetzky S, Wendler O, Muller JM, Schule R et al .Белки, содержащие только LIM, FHL2 и FHL3 взаимодействуют с альфа- и бета-субъединицами рецептора мышечного интегрина альфа7бета1. J Biol Chem 2004; 279 : 28641–28652.

CAS Статья Google Scholar

44

Van Nhieu GT, Krukonis ES, Reszka AA, Horwitz AF, Isberg RR. Мутации в цитоплазматическом домене цепи интегрина бета1 указывают на роль факторов эндоцитоза в интернализации бактерий. J Biol Chem 1996; 271 : 7665–7672.

CAS Статья Google Scholar

45

Hill AA, Райли PR. Дифференциальная регуляция активности гомодимера Hand1 и гетеродимера Hand1-E12 кофактором FHL2. Mol Cell Biol 2004; 24 : 9835–9847.

CAS Статья Google Scholar

46

Labalette C, Nouet Y, Sobczak-Thepot J, Armengol C, Levillayer F, Gendron MC и др. .Белок, содержащий только LIM, FHL2 регулирует экспрессию циклина D1 и пролиферацию клеток. J Biol Chem 2008; 283 : 15201–15208.

CAS Статья Google Scholar

47

Scholl FA, McLoughlin P, Ehler E, de Giovanni C, Schafer BW. Dral — это ген, чувствительный к P53, белковый продукт которого четыре с половиной домена Lim индуцирует апоптоз. J Cell Biol 2000; 151 : 495–506.

CAS Статья Google Scholar

48

Шакнович Р., Еяти П.Л., Ивинс С., Мельник А., Лемперт С., Ваксман С. и др. .Белок цинкового пальца промиелоцитарного лейкоза влияет на рост, дифференцировку и апоптоз миелоидных клеток. Mol Cell Biol 1998; 18 : 5533–5545.

CAS Статья Google Scholar

49

Barna M, Hawe N, Niswander L, Pandolfi PP. Plzf регулирует формирование рисунка конечностей и осевого скелета. Nat Genet 2000; 25 : 166–172.

CAS Статья Google Scholar

50

McLoughlin P, Ehler E, Carlile G, Licht JD, Schäfer BW.Белок, содержащий только LIM, DRAL / FHL2 взаимодействует с белком цинковых пальцев при промиелоцитарном лейкозе и является его корепрессором. J Biol Chem 2002; 277 : 37045–37053.

CAS Статья Google Scholar

51

Chen Z, Brand NJ, Chen A, Chen SJ, Tong JH, Wang ZY и др. . Слияние нового Kruppel-подобного гена цинкового пальца и локуса рецептора ретиноевой кислоты-альфа из-за варианта транслокации t (11; 17), связанного с острым промиелоцитарным лейкозом. EMBO J 1993; 12 : 1161–1167.

CAS Статья Google Scholar

52

Дик В.А., Брахим В., Браун С., Аснафи В., Дастугу Н., Бернард О.А. и др. . Профили экспрессии CALM-AF10 + T-ALL характеризуются сверхэкспрессией онкогенов HOXA и BMI1. Leukemia 2005; 19 : 1948–1957.

CAS Статья Google Scholar

53

Лин Й.Х., Какадиа П.М., Чен Й., Ли Й.К., Дешпанде А.Дж., Буске С. и др. .Глобальное снижение эпигенетической метки метилирования h4K79 и повышение хромосомной нестабильности при CALM-AF10-положительных лейкозах. Кровь 2009 г .; 114 : 651–658.

CAS Статья Google Scholar

54

Чен Д., Сюй В., Бейлс Е, Кольменарес С., Коначчи-Соррелл М., Исии С. и др. . SKI активирует передачу сигналов Wnt / бета-катенин в меланоме человека. Cancer Res 2003; 63 : 6626–6634.

CAS PubMed Google Scholar

55

Маецель Д., Дензел С., Мак Б., Канис М., Вент П., Бенк М. и др. . Ядерная передача сигналов опухоль-ассоциированным антигеном EpCAM. Nat Cell Biol 2009; 11 : 162–171.

CAS Статья Google Scholar

56

Цянь Цз., Мао Л., Фернальд А.А., Ю Х, Луо Р., Цзян Ю. и др. . Повышенная экспрессия FHL2 приводит к аномальному миелопоэзу in vivo . Лейкемия 2009; 23 : 1650–1657.

CAS Статья Google Scholar

57

Schoch C, Kohlmann A, Schnittger S, Brors B, Dugas M, Mergenthaler S и др. . Острые миелоидные лейкозы с реципрокными перестройками можно отличить по специфическим профилям экспрессии генов. Proc Natl Acad Sci USA 2002; 99 : 10008–10013.

CAS Статья Google Scholar

58

Гримуэйд Д., Уокер Х., Оливер Ф., Уитли К., Харрисон С., Харрисон Г. и др. .Важность диагностической цитогенетики для исходов при ОМЛ: анализ 1612 пациентов, включенных в исследование MRC AML 10. Рабочие группы Совета по медицинским исследованиям для взрослых и детей по лейкемии. Кровь 1998; 92 : 2322–2333.

CAS PubMed Google Scholar

59

Киллик С., Матутес Э., Паулз Р.Л., Мин Т., Треливен Дж. Г., Реге К.П. и др. . Острый эритроидный лейкоз (M6): исход трансплантации костного мозга. Leuk Lymphoma 1999; 35 : 99–107.

CAS Статья Google Scholar

60

Hamidouche Z, Hay E, Vaudin P, Charbord P, Schule R, Marie PJ et al . FHL2 опосредует индуцированную дексаметазоном дифференцировку мезенхимальных клеток в остеобласты, активируя экспрессию Runx2, зависящую от передачи сигналов Wnt / бета-катенина. FASEB J 2008; 22 : 3813–3822.

CAS Статья Google Scholar

Сигнал ядерного экспорта, полученный из CALM, необходим для CALM-AF10-опосредованного лейкемогенеза | Кровь

Транслокация t (10; 11) (p13; q14) дает начало гибридному гену CALM-AF10 , который первоначально был идентифицирован в линии моноцитарных клеток человека U937. ¹ Впоследствии транслокаций CALM-AF10 были идентифицированы у пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ), острым Т-клеточным лимфобластным лейкозом и злокачественной лимфомой и, как правило, связаны с плохим прогнозом. ^2,3 Хотя было идентифицировано несколько точек разрыва, слитые белки CALM-AF10 последовательно включают большую часть кодирующей последовательности CALM в рамке считывания с частью AF10, которая содержит домен взаимодействия белка октапептида / лейциновой молнии (OM-LZ). ^4-6 Ретровирусная трансдукция CALM-AF10 вызывает острый лейкоз в модели трансплантации костного мозга мыши. ⁷ Аналогичным образом, мыши, экспрессирующие трансген CALM-AF10 , заболевают острым лейкозом в среднем возрасте 12 мес. ⁸ Лейкозы CALM-AF10 характеризуются усиленной экспрессией гомеобоксов HOXA , включая HOXA5 , HOXA7 , HOXA9 и HOXA10 . ^8-10

AF10 (также известный как MLLT10 ) был впервые идентифицирован как партнер слияния для гена MLL у пациентов с AML. ¹¹ AF10 кодирует ядерный белок, который является предполагаемым фактором транскрипции и содержит домены LAP / PHD-пальца и последовательности ядерной локализации. ^12,13 Карбокси-конец AF10 содержит домен OM-LZ, который, как было ранее показано, необходим и достаточен для CALM-AF10-опосредованного лейкемогенеза. ^5,14 Домен OM-LZ AF10 взаимодействует с различными белками, включая метилтрансферазу h4K79, DOT1L. ¹⁴ CALM-AF10 лейкемии отмечены глобальным гипометилированием h4K79, тогда как локус Hoxa гиперметилирован h4K79. ^15,16 Следовательно, аберрантное рекрутирование DOT1L с помощью OM-LZ домена AF10, как полагают, является критическим для CALM-AF10-опосредованного лейкемогенеза. ¹⁶ Однако точный механизм, с помощью которого это происходит, еще не выяснен.

Ген лимфоидного миелоидного лейкоза сборки клатрина ( CALM ; также известный как PICALM ) кодирует белок из 652 аминокислот. CALM преимущественно локализуется в цитоплазме и, как было показано, необходим для упорядоченного прогрессирования клатрин-опосредованного эндоцитоза. ¹⁷ Структурно CALM содержит домены, которые участвуют в эндоцитозе, включая N-концевой гомологичный домен эпсина ¹⁸ и клатрин-связывающий домен на карбокси-конце. ^17,19 CALM также, как было показано, перемещается между цитоплазмой и ядром, где он может активировать транскрипцию, хотя это остается плохо изученным. ²⁰ Хотя нарушение эндоцитоза в результате транслокаций гена CALM было предположено, что оно играет роль в лейкемогенезе, ^5,21 специфический вклад CALM в CALM-AF10-зависимый лейкемогенез остается неясным.

Здесь мы выполнили структурно-функциональный анализ, чтобы выяснить вклад CALM в CALM-AF10-опосредованный лейкемогенез.Мы определили, что карбокси-конец CALM (аминокислотные остатки 544-553) содержит сигнал ядерного экспорта (NES), который опосредует цитоплазматическую локализацию CALM-AF10. Используя клоногенные анализы костного мозга in vitro и эксперименты по трансплантации in vivo, мы обнаружили, что CALM NES необходим и достаточен для CALM-AF10-опосредованного лейкемогенеза. Эти данные раскрывают новый онкогенный механизм, с помощью которого NES в лейкемогенном слитом белке опосредует трансформацию.

мышей выращивали и содержали в Duke Animal Facility.Все процедуры in vivo и эвтаназии в этом исследовании проводились в строгом соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здоровья. Все исследования на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Университета Дьюка (протокол № A029-10-02). Были приложены все усилия, чтобы минимизировать страдания животных. Первичные клетки костного мозга выделяли от 4-8-недельных мышей B6 (Cg) -Tyr ^C-2J / J (B6-albino мышей, Jackson Laboratory), которым ранее 4-5 дней вводили 5-фторурацил (150 мг / кг, инъекция в хвостовую вену).Гемопоэтические клетки-предшественники (HP) были обогащены из длинных костей задней ноги путем истощения клонов и инфицированы, как описано ранее, ²³ со следующими модификациями: антитела, используемые для истощения клонов, были ограничены антителами против CD11b, Gr1 и B220 (eBioscience) . Трансдуцированные HP высевали в среду с метилцеллюлозой (среда HSC-CFU; Miltenyi Biotec), содержащая IL-3, IL-6, гранулоцитарный макрофаг-колониестимулирующий фактор (все в концентрации 10 нг / мл; PeproTech) и фактор стволовых клеток (100 нг / мл; PeproTech) в концентрации 1000 клеток / мл на лунку (в 6-луночном планшете).Через семь дней подсчитывали колонии, состоящие из> 100 клеток. Клетки, собранные из объединенных колоний, повторно пересевали в идентичных условиях при концентрации 10 000 клеток / мл для образования вторичных и третичных колоний. Цитоспиновые препараты и иммунофенотипические анализы (антитела против Mac-1, анти-Gr-1 и анти-c-Kit от eBioscience) проводили с использованием клеток из третичных колоний.

Ранее было определено, что области на карбокси-конце CALM (а.о. 400-648) достаточно для CALM-AF10-опосредованной трансформации. ⁵ Чтобы идентифицировать специфические домены в этой области, которые вносят вклад в трансформацию, мы выполнили структурно-функциональный анализ слитого белка CALM-AF10. Были получены два мутанта с делецией CALM-AF10 [CALM (1-583) -AF10 и CALM (1-552) -AF10; Рисунок 1], и мы проверили способность этих усеченных мутантов иммортализовать первичные мышиные HP с помощью клоногенного анализа костного мозга in vitro. ²³ HP были ретровирусно трансдуцированы с помощью пустого вектора MSCV-IRES-eGFP, полноразмерного CALM-AF10 или усеченных мутантов CALM-AF10.Клетки высевали в метилцеллюлозу, и образование колоний оценивали при последующих пересевах; присутствие колоний после третьего пассажа указывает на расширенное самообновление, именуемое здесь «иммортализацией». Как показано на рисунке 1, полноразмерный CALM-AF10 последовательно увековечивает HP в этом анализе. Вторичные и третичные колонии представляют собой компактные гиперклеточные бластоподобные колонии и состоят из незрелых миелоидных клеток Mac-1 ⁺ / Gr-1 ⁺ и макрофагов (дополнительная фигура 1A-C).

Рисунок 1

Область между CALM aa 520-583 важна для CALM-AF10-опосредованной иммортализации. Клетки-предшественники костного мозга мыши трансдуцировали ретровирусными конструкциями, экспрессирующими белки CALM-AF10, схематически показанные слева. Гистограмма (справа) показывает количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, посеянных в культурах метилцеллюлозы второго и третьего пассажа. Среднее значение ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 3 [CALM (1-552) -AF10], 4 [CALM (520-583) -AF10] или 5 [Vector, CALM-AF10 и CALM (1-583). ) -AF10] независимые эксперименты.

Рисунок 1

Область между CALM aa 520-583 важна для иммортализации, опосредованной CALM-AF10. Клетки-предшественники костного мозга мыши трансдуцировали ретровирусными конструкциями, экспрессирующими белки CALM-AF10, схематически показанные слева. Гистограмма (справа) показывает количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, посеянных в культурах метилцеллюлозы второго и третьего пассажа. Среднее значение ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 3 [CALM (1-552) -AF10], 4 [CALM (520-583) -AF10] или 5 [Vector, CALM-AF10 и CALM (1-583). ) -AF10] независимые эксперименты.

Подобно полноразмерному CALM-AF10, трансдуцированные CALM (1-583) -AF10 предшественники дали начало сотням колоний в третьем раунде посева (рис. 1). Однако клетки, трансдуцированные CALM (1-552) -AF10, утратили свой колониеобразующий потенциал при вторичном пассаже, аналогично тем, которые трансдуцировались с помощью пустого векторного контроля (рис. 1). Кроме того, мы создали мутант CALM-AF10, который включает CALM aa 520-583, слитый с AF10 [CALM (520-583) -AF10].Как показано на рисунке 1, клетки, трансдуцированные CALM (520-583) -AF10, дали начало сотням вторичных и третичных колоний, сравнимых с колониями, наблюдаемыми с полноразмерным CALM-AF10. Экспрессия мутантных белков CALM-AF10 подходящего размера была подтверждена вестерн-блоттингом (дополнительная фигура 2B). Из этих результатов мы заключаем, что 520-583 а.о. CALM достаточно для иммортализации, опосредованной CALM-AF10.

Анализ последовательности CALM aa 520-583 выявил присутствие предполагаемого NES, расположенного между 544 и 553 аминокислотами (рис. 2A). ¹⁶ NES представляет собой гидрофобную аминокислотную последовательность, богатую лейцином, которая распознается ядерным экспортным рецептором CRM1 (также известным как XPO1). CRM1 опосредует экспорт NES-содержащих белков из ядра в цитоплазму через комплекс ядерных пор. ²⁵ Лептомицин B (LMB) является ингибитором ядерного экспорта (NEI), который ковалентно модифицирует CRM1 в NES-связывающем кармане. ^26,27 Следует отметить, что ранее сообщалось, что лечение LMB вызывает ядерное накопление CALM. ²⁰ Поскольку белок CALM-AF10 локализуется главным образом в цитоплазме, ¹⁶ идентификация мотива NES в CALM повышает вероятность того, что локализация слитого белка зависит от CRM1-опосредованного ядерного экспорта. Аналогичным образом, сообщалось, что слитый с флуоресцентным белком CALM-AF10 становится ядерным в присутствии LMB. ^21,28 В соответствии с этими открытиями мы наблюдали, что CALM-AF10 локализуется в цитоплазме временно трансфицированных клеток HEK293 (рис. 2B, левая панель), и после обработки LMB происходит резкое перераспределение CALM-AF10 в ядро (рис. 2Б, правые панели).Затем мы проанализировали локализацию CALM-AF10 в линии лейкозных клеток мыши CALM-AF10 . Как показано на рисунке 2C, CALM-AF10 локализуется как в ядре, так и в цитоплазме лейкозных клеток. После добавления LMB CALM-AF10 становится исключительно ядерным (рис. 2C). Эти результаты показывают, что CALM-AF10 подвергается ядерно-цитоплазматическому перемещению и экспортируется из ядра CRM1-зависимым образом.

Рисунок 2

CALM содержит функциональную NES, которая необходима для иммортализации, опосредованной CALM-AF10. (A) Выравнивание NES внутри CALM (а.о. 544-553) и консенсусной последовательности CRM1-зависимой NES, где ϕ представляет собой любой гидрофобный остаток, а x представляет собой любую аминокислоту. Гидрофобные аминокислотные остатки CALM NES были точечно мутированы на аланины (A) для создания 3 мутантов: CALM (mutNES1) -AF10, CALM (mutNES2) -AF10 и CALM (mutNES1 + 2) -AF10. (B) Конфокальный иммунофлуоресцентный анализ (IF) клеток HEK293, временно трансфицированных Flag-tagged CALM-AF10 и проанализированных в отсутствие (слева) или в присутствии (справа) LMB (10 нМ, 1 час).(C) Конфокальный IF-анализ мышиных Calm ^NULL CALM-AF10 лейкозных клеток, выращенных в отсутствие (слева) или в присутствии (справа) LMB (0,1 нМ, 12 ч). (D) Конфокальный IF клеток HEK293, временно трансфицированных мутантами CALM (mutNES) -AF10. (E) Конфокальный IF MLL-ENL — иммортализованный Calm ^NULL гемопоэтических предшественников, ретровирусно инфицированных Flag-tag-tagged CALM-AF10 (левые панели) или CALM (mutNES1 + 2) -AF10 ).Ядра клеток визуализировали с помощью DAPI (синий). Полосы представляют собой 20 мкм для всех панелей. (F) Колониеобразующий анализ мышиных HP, инфицированных пустым вектором, точечными мутантами CALM-AF10 или NES. Столбцы представляют собой количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, засеянных культурами второго и третьего пассажа. Среднее значение ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 2 [CALM (mutNES1) -AF10], 3 [CALM (mutNES2) -AF10] и CALM [mutNES1 + 2) -AF10] или 6 (Vector и CALM-AF10). самостоятельные эксперименты. Нижняя панель представляет собой вестерн-блоттинг клеток HEK293, трансфицированных пустым вектором, точечными мутантами CALM-AF10 и CALM (mutNES) -AF10.

Рисунок 2

CALM содержит функциональную NES, которая необходима для иммортализации, опосредованной CALM-AF10. (A) Выравнивание NES внутри CALM (а.о. 544-553) и консенсусной последовательности CRM1-зависимой NES, где ϕ представляет собой любой гидрофобный остаток, а x представляет собой любую аминокислоту. Гидрофобные аминокислотные остатки CALM NES были точечно мутированы на аланины (A) для создания 3 мутантов: CALM (mutNES1) -AF10, CALM (mutNES2) -AF10 и CALM (mutNES1 + 2) -AF10. (B) Конфокальный иммунофлуоресцентный анализ (IF) клеток HEK293, временно трансфицированных Flag-tagged CALM-AF10 и проанализированных в отсутствие (слева) или в присутствии (справа) LMB (10 нМ, 1 час).(C) Конфокальный IF-анализ мышиных Calm ^NULL CALM-AF10 лейкозных клеток, выращенных в отсутствие (слева) или в присутствии (справа) LMB (0,1 нМ, 12 ч). (D) Конфокальный IF клеток HEK293, временно трансфицированных мутантами CALM (mutNES) -AF10. (E) Конфокальный IF MLL-ENL — иммортализованный Calm ^NULL гемопоэтических предшественников, ретровирусно инфицированных Flag-tag-tagged CALM-AF10 (левые панели) или CALM (mutNES1 + 2) -AF10 ).Ядра клеток визуализировали с помощью DAPI (синий). Полосы представляют собой 20 мкм для всех панелей. (F) Колониеобразующий анализ мышиных HP, инфицированных пустым вектором, точечными мутантами CALM-AF10 или NES. Столбцы представляют собой количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, засеянных культурами второго и третьего пассажа. Среднее значение ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 2 [CALM (mutNES1) -AF10], 3 [CALM (mutNES2) -AF10] и CALM [mutNES1 + 2) -AF10] или 6 (Vector и CALM-AF10). самостоятельные эксперименты. Нижняя панель представляет собой вестерн-блоттинг клеток HEK293, трансфицированных пустым вектором, точечными мутантами CALM-AF10 и CALM (mutNES) -AF10.

Для определения функциональной роли предполагаемых NES CALM мы точечно мутировали консервативные гидрофобные остатки NES в полноразмерном CALM-AF10. Как показано на фиг. 2A, 2 или 4 остатка лейцина / изолейцина были заменены аланинами [L544A и L547A в CALM (mutNES1) -AF10; L551A и I553A в CALM (mutNES2) -AF10 и L544A, L547A, L551A и I553A в CALM (mutNES1 + 2) -AF10]. В отличие от CALM-AF10 дикого типа, CALM (mutNES1) -AF10, CALM (mutNES2) -AF10 и CALM (mutNES1 + 2) -AF10 локализуются исключительно в ядрах клеток HEK293 (рис. 2D).Аналогично, при ретровирусной экспрессии в гемопоэтических клетках мышей CALM-AF10 локализуется преимущественно в цитоплазме, тогда как CALM (mutNES1 + 2) -AF10 является исключительно ядерным (рис. 2E). Из этих результатов мы заключаем, что CALM содержит функциональную NES между 544 и 553 аминокислотами, которая опосредует цитоплазматическую локализацию CALM-AF10.

Чтобы определить, достаточно ли CALM NES для CALM-AF10-опосредованной иммортализации, мы объединили CALM aa 540-557 в рамке с AF10 (NES ^CALM -AF10; Рисунок 3A).CALM aa 540-557 включают консервативные CRM1-зависимые NES (фиг. 2A), с 4 аминокислотами, фланкирующими каждую сторону, для сохранения структуры NES. ²⁹ При временной трансфекции в клетки HEK293 NES ^CALM -AF10 локализуется преимущественно в цитоплазме, тогда как AF10 (аминокислотные остатки 234-1068) имеет ядерное распределение (рис. 3B). После обработки LMB NES ^CALM -AF10 становится исключительно ядерным (рис. 3B). Следовательно, слияние CALM NES с AF10 эффективно опосредует CRM1-зависимый ядерный экспорт AF10.

Рисунок 3

Слияние консервативных мотивов белка NES с AF10 придает цитоплазматическую локализацию и потенциал иммортализации in vitro. (A) Выравнивание CALM NES (аминокислотные остатки 540-557) и мотивов NES из гетерологичных белков, ABL1 (аминокислотные остатки 1086-1103), Rev (аминокислотные остатки 70-87), APC (аминокислотные остатки 63-79) и PKIA ( аа 33-50), соединенный в рамке с AF10 (на аа 234). Ключевые гидрофобные остатки в каждом NES выделены.(B) Конфокальный IF-анализ клеток HEK293, трансфицированных Flag-tagged AF10 (а.о. 234-1068) или слияния NES ^CALM -AF10 в отсутствие (в центре) или в присутствии (справа) LMB (10 нМ, 1 час) . (C) Конфокальный IF клеток HEK293, трансфицированных гетерологичными слияниями NES-AF10. Ядра клеток окрашивали DAPI (синий). Полосы представляют собой 20 мкм. (D) Колониеобразующий анализ конструкций NES-AF10. Столбцы представляют количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, засеянных во втором и третьем раундах культур.Среднее ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 3 (NES ^ABL1 -AF10), 4 (NES ^CALM -AF10, NES ^PKIA -AF10, NES ^APC -AF10, NES ^Rev -AF10 ) или 5 (Vector и CALM-AF10) независимых экспериментов.

Рисунок 3

Слияние консервативных мотивов белка NES с AF10 придает цитоплазматическую локализацию и потенциал иммортализации in vitro. (A) Выравнивание CALM NES (аминокислотные остатки 540-557) и мотивов NES из гетерологичных белков, ABL1 (аминокислотные остатки 1086-1103), Rev (аминокислотные остатки 70-87), APC (аминокислотные остатки 63-79) и PKIA ( аа 33-50), соединенный в рамке с AF10 (на аа 234).Ключевые гидрофобные остатки в каждом NES выделены. (B) Конфокальный IF-анализ клеток HEK293, трансфицированных Flag-tagged AF10 (а.о. 234-1068) или слияния NES ^CALM -AF10 в отсутствие (в центре) или в присутствии (справа) LMB (10 нМ, 1 час) . (C) Конфокальный IF клеток HEK293, трансфицированных гетерологичными слияниями NES-AF10. Ядра клеток окрашивали DAPI (синий). Полосы представляют собой 20 мкм. (D) Колониеобразующий анализ конструкций NES-AF10. Столбцы представляют количество колоний, образовавшихся на 10 000 клеток, засеянных во втором и третьем раундах культур.Среднее ± SEM показано для повторяющихся образцов, проанализированных в 3 (NES ^ABL1 -AF10), 4 (NES ^CALM -AF10, NES ^PKIA -AF10, NES ^APC -AF10, NES ^Rev -AF10 ) или 5 (Vector и CALM-AF10) независимых экспериментов.

Чтобы проверить, достаточно ли CALM NES для придания иммортализирующего потенциала AF10, мы исследовали способность NES ^CALM -AF10 иммортализовать мышиные HP in vitro.Ранее было продемонстрировано, что экспрессия только AF10 не приводит к иммортализации. ³⁰ Однако, подобно CALM-AF10, трансдукция NES ^CALM -AF10 в HP приводит к появлению сотен вторичных и третичных колоний (рис. 3D) с характеристиками, аналогичными колониям CALM-AF10 (дополнительные рис. 1A-C). Следовательно, CALM NES, слитый с AF10, достаточен для иммортализации миелоида in vitro.

Чтобы определить, является ли единственный структурный вклад CALM в NES, мы слили мотивы NES из других белков с AF10 и оценили иммортализирующую способность полученных химерных белков.Основываясь на предыдущих исследованиях, которые охарактеризовали функциональность нескольких консенсусных последовательностей ядерного экспорта, мы решили слить мотивы белка NES ABL1, Rev (от ВИЧ-1), APC и PKIA с AF10 (рис. 3A). ^29,31 Как показано на фиг. 3C, NES ^ABL1 -AF10, NES ^Rev -AF10, NES ^APC -AF10 и NES ^PKIA -AF10 все локализуются в цитоплазме при экспрессии в клетках HEK293. Следовательно, каждый из этих консервативных белковых мотивов NES обеспечивает эффективный ядерный экспорт AF10.

Затем мы исследовали способность конструкций NES-AF10 иммортализовать мышиные HP in vitro. Первичные мышиные HPs ретровирусно трансдуцировали NES ^ABL1 -AF10, NES ^Rev -AF10, NES ^APC -AF10 или NES ^PKIA -AF10 и засевали метилцеллюлозой. Как показано на рисунке 3D, трансдукция каждым из слияний NES-AF10 приводила к образованию вторичных и третичных колоний, что свидетельствует об иммортализации.Эти результаты подчеркивают, что слияние NES с AF10 имеет решающее значение для приобретения онкогенных свойств.

Чтобы изучить молекулярные механизмы, с помощью которых ядерный экспорт CALM-AF10 способствует лейкемогенезу, мы проанализировали эпигенетический и транскрипционный статус клеток, экспрессирующих цитоплазматический или ядерный CALM-AF10. Эмбриональные фибробласты мыши (MEF) ретровирусно трансдуцировали пустым вектором, CALM-AF10 или CALM (NESmut1 + 2) -AF10, и экспрессию белка проверяли с помощью вестерн-блоттинга (фиг. 4A).CALM-AF10 локализуется преимущественно в цитоплазме MEF. Однако следует отметить, что некоторая точечная окраска ядер обнаруживается в клетках, экспрессирующих CALM-AF10, вероятно, отражая тот факт, что CALM-AF10 перемещается между ядром и цитоплазмой. Как и ожидалось, CALM (NESmut1 + 2) -AF10 локализуется исключительно в ядрах MEFs (Figure 4B).

Рисунок 4

CALM NES необходим для аберрантного метилирования h4K79 и повышенной экспрессии кластера Hoxa . (A-B) Вестерн-блоттинг (A) и конфокальный IF (B) MEF, стабильно инфицированных пустым вектором, CALM-AF10 и CALM (mutNES1 + 2) -AF10. Данные представляют один набор MEF (из 3), стабильно инфицированных соответствующими конструкциями. (C) Репрезентативный вестерн-блоттинг уровней di-me h4K79 и гистона h4 в стабильно инфицированных MEF. Количественные данные (внизу) представляют собой среднее ± SEM значений di-me h4K79, нормализованных к актину, из отдельно сгенерированных линий MEF для каждой конструкции (n = 3). Статистический анализ выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом множественного сравнения Даннета с использованием пустых векторно-трансдуцированных MEF в качестве контроля; ** П <.01 (D) Конфокальная ПЧ MEF, коэкспрессирующих DOT1L (красный) и помеченный флагом CALM-AF10 (зеленый, слева), CALM (NESmut1 + 2) -AF10 (зеленый, средний) или CALM-AF10 ^ΔOMLZ (зеленый, верно). Полоса соответствует 20 мкм. (E) Уровни транскрипта Hoxa измеряли с помощью ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени и нормализовали по генам «домашнего хозяйства» GAPDH и β2M, а затем к пустым инфицированным вектором MEF методом ΔΔCt. (F) Анализ иммунопреципитации хроматина di-me h4K79 в промоторных областях кластерных генов Hoxa .Амплификацию Hoxa измеряли с помощью ПЦР в реальном времени как процент от ввода, а затем нормализовали по векторному контролю. Для панелей E-F результаты показаны как среднее ± SEM для отдельно созданных линий MEF для каждой конструкции (n = 3). Белые полосы представляют собой пустой вектор, серые полосы — CALM-AF10, а черные полосы — CALM (mutNES1 + 2) -AF10. Статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа для каждого гена Hoxa с последующим тестом множественного сравнения Даннета. Было обнаружено, что только CALM-AF10 значительно отличается от векторного контроля: ** P <.01, * П <.05.

Рисунок 4

CALM NES необходим для аберрантного метилирования h4K79 и повышенной экспрессии кластера Hoxa . (A-B) Вестерн-блоттинг (A) и конфокальный IF (B) MEF, стабильно инфицированных пустым вектором, CALM-AF10 и CALM (mutNES1 + 2) -AF10. Данные представляют один набор MEF (из 3), стабильно инфицированных соответствующими конструкциями. (C) Репрезентативный вестерн-блоттинг уровней di-me h4K79 и гистона h4 в стабильно инфицированных MEF.Количественные данные (внизу) представляют собой среднее ± SEM значений di-me h4K79, нормализованных к актину, из отдельно сгенерированных линий MEF для каждой конструкции (n = 3). Статистический анализ выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом множественного сравнения Даннета с использованием пустых векторно-трансдуцированных MEF в качестве контроля; ** P <.01 (D) Конфокальная IF MEF, коэкспрессирующих DOT1L (красный) и помеченный флагом CALM-AF10 (зеленый, слева), CALM (NESmut1 + 2) -AF10 (зеленый, средний) или CALM- AF10 ^ΔOMLZ (зеленый, справа).Полоса соответствует 20 мкм. (E) Уровни транскрипта Hoxa измеряли с помощью ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени и нормализовали по генам «домашнего хозяйства» GAPDH и β2M, а затем к пустым инфицированным вектором MEF методом ΔΔCt. (F) Анализ иммунопреципитации хроматина di-me h4K79 в промоторных областях кластерных генов Hoxa . Амплификацию Hoxa измеряли с помощью ПЦР в реальном времени как процент от ввода, а затем нормализовали по векторному контролю. Для панелей E-F результаты показаны как среднее ± SEM для отдельно созданных линий MEF для каждой конструкции (n = 3).Белые полосы представляют собой пустой вектор, серые полосы — CALM-AF10, а черные полосы — CALM (mutNES1 + 2) -AF10. Статистический анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа для каждого гена Hoxa с последующим тестом множественного сравнения Даннета. Было обнаружено, что только CALM-AF10 значительно отличается от векторного контроля: ** P <0,01, * P <0,05.

AF10 взаимодействует с гистоновой h4K79 метилтрансферазой DOT1L через мотив OM-LZ, ¹⁴ , который необходим для трансформации. CALM-AF10 Клетки лейкемии демонстрируют глобальное снижение диметилирования h4K79, что является возможным результатом неправильного нацеливания DOT1L на хроматин. ^15,21 Чтобы определить, зависит ли этот фенотип от ядерного экспорта CALM-AF10, мы проанализировали уровни диметилированного (di-me) h4K79 в MEF, экспрессирующих цитоплазматический или ядерный CALM-AF10. В соответствии с опубликованными результатами, стабильная экспрессия CALM-AF10 ^15,21 привела к снижению di-me h4K79 на 70% по сравнению с векторным контролем (средняя полоса рисунка 4C, количественная оценка приведена на нижнем графике).Однако экспрессия CALM (mutNES1 + 2) -AF10 не влияла на метилирование h4K79 (правая полоса на рис. 4C, количественно показано на нижнем графике). Эти результаты предполагают, что ядерный экспорт CALM-AF10 может быть необходим для его способности вмешиваться в активность DOT1L.

Исключение DOT1L из ядра может объяснить глобальную потерю метилирования h4K79, наблюдаемую в клетках, экспрессирующих CALM-AF10. Чтобы проверить, действительно ли CALM-AF10 неправильно локализует DOT1L из ядра, DOT1L коэкспрессируется с CALM-AF10 или CALM (NESmut1 + 2) -AF10 в MEF.Как показано на рисунке 4D, CALM-AF10 и DOT1L локализуются совместно. Распределение вариабельно: 56% клеток, экспрессирующих CALM-AF10 и DOT1L в цитоплазме, и 44% клеток, демонстрирующих преимущественно ядерное распределение CALM-AF10 и DOT1L (рис. 4D, левая панель). Напротив, CALM (NESmut1 + 2) -AF10 и DOT1L совместно локализуются исключительно в ядре (100% клеток) (средние панели на рис. 4D). Как сообщалось ранее, ¹⁶ DOT1L остается ядерным в присутствии мутанта CALM-AF10, у которого отсутствует домен OM-LZ (AF10 aa 710-783; CALM-AF10 ^ΔOMLZ ) (рис. 4D, правые панели).Эти результаты подчеркивают, что полноразмерные CALM-AF10 и DOT1L совместно локализуются, и в присутствии CALM-AF10 DOT1L становится цитоплазматическим примерно в половине клеток.

Помимо сниженного метилирования h4K79, трансформирующий потенциал CALM-AF10 был связан с усилением транскрипции кластерных генов Hoxa . ^8-10 Как показано на рисунке 4E, стабильная экспрессия CALM-AF10 в MEF коррелирует с повышенными уровнями транскриптов Hoxa5 (в 2 раза), Hoxa9 (1.7-кратно), Hoxa10 (3,5-кратно) и Hoxa11 (3-кратно) по сравнению с пустым вектором. Напротив, экспрессия CALM (mutNES1 + 2) -AF10 существенно не изменила уровни экспрессии Hoxa (фиг. 4E). Было показано, что h4K79 локально гиперметилирован по локусу Hoxa5 в лейкозных клетках CALM-AF10 . Чтобы оценить, является ли локус Hoxa гиперметилированным в CALM-AF10-экспрессирующих MEFs, мы выполнили иммунопреципитацию хроматина (ChIP).Диметилирование h4K79 обогащено промоторами генов Hoxa в клетках CALM-AF10 (рис. 4F), тогда как клетки CALM (mutNES1 + 2) -AF10 демонстрируют паттерн метилирования h4K79, аналогичный паттерну метилирования пустых вектор-экспрессирующих клеток (рис. 4F). ).

Наблюдение, что h4K79 аберрантно метилировано NES-зависимым образом, привело нас к исследованию, предотвращает ли LMB нацеливание DOT1L на локус Hoxa в клетках CALM-AF10.Вектор или MEF, экспрессирующие CALM-AF10, инкубировали с 1 нМ LMB в течение 24 часов и выполняли диметиловый h4K79 ChIP. Инкубация LMB снижает метилирование h4K79 на промоторных областях Hoxa в клетках CALM-AF10 на ~ 40% (дополнительная фигура 3A). Однако LMB существенно не изменяет метилирование h4K79 в клетках, экспрессирующих вектор (дополнительная фигура 3B). Эти результаты предполагают, что взаимодействие CRM1-NES является критическим для нацеливания DOT1L и / или активности в локусе Hoxa в клетках CALM-AF10.Вместе эти данные подтверждают важность CALM NES в индукции нарушенного эпигенетического и транскрипционного состояния, наблюдаемого при лейкозах CALM-AF10 .

Чтобы проанализировать лейкемогенный потенциал NES ^CALM -AF10 in vivo, мы вводили CALM-AF10–, CALM (520-583) -AF10– или NES ^CALM -AF10 –-трансдуцированные предшественники смертельно облученным сингенным мышам. Как показано на фиг. 5A, экспрессия полноразмерного CALM-AF10 вызвала острый лейкоз у 100% мышей (n = 10) со средней выживаемостью 122 дня.CALM (520-583) -AF10 также индуцировал лейкемогенез у 100% мышей (n = 5) с латентным периодом, аналогичным таковому у CALM-AF10 (медиана выживаемости 113 дней). Важно отметить, что экспрессия NES ^CALM -AF10 была достаточной, чтобы вызвать острый лейкоз у 5 из 7 мышей-реципиентов, хотя и с длительным латентным периодом (медиана выживаемости 250 дней) (фиг. 5A). Приживление, о чем свидетельствует процент лейкоцитов, экспрессирующих GFP, в периферической крови через 24-27 дней после трансплантации, произошло у всех реципиентов (30% -70% GFP; Рисунок 5B).Лейкемии мышей в каждой когорте имели сходные характеристики, включая увеличение селезенки (рис. 5C), массивную инфильтрацию костного мозга миелобластами и лейкоцитоз (рис. 5D). Подавляющее большинство бластов костного мозга коэкспрессировали миелоидные антигены Mac-1 и Gr-1, тогда как экспрессия cKit и B220 отсутствовала или наблюдалась на небольшой части клеток (дополнительная фигура 4). Поскольку лейкозы NES ^CALM -AF10 имели более длительный латентный период, мы оценили возможность их трансплантации вторичным реципиентам.Пересаженные мыши умерли от агрессивных лейкозов со средней задержкой 28 дней (рис. 5А). Из этих результатов мы заключаем, что CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10 индуцируют AML, аналогичные полноразмерному CALM-AF10.

Рисунок 5

CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10 достаточны для индукции лейкемии in vivo с характеристиками, аналогичными лейкемии CALM-AF10 . (A) Кривая выживаемости Каплана-Мейера мышей, пересаженных пустым вектором (n = 4), CALM-AF10 (n = 10), CALM (520-583) -AF10 (n = 5) или NES ^CALM — AF10 (n = 7) трансдуцировал клетки костного мозга. Все мыши, трансдуцированные вектором, оставались свободными от лейкемии в ходе исследования и были умерщвлены через 320 дней после трансплантации. Кривая выживаемости мышей с вторичным трансплантатом (n = 5), которым вводили первичные лейкозы NES ^CALM -AF10 (2 первичных лейкемии, введенных 2 или 3 мышам), изображена пунктирной красной линией.(B) Процент GFP-положительных лейкоцитов (WBC) в периферической крови мышей, измеренный через 27 дней (CALM-AF10), 25 дней [CALM (520-583) -AF10] или 24 дня (NES ^CALM). -AF10) после трансплантации. (C) Вес селезенки мышей с лейкемиями CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10, измеренный во время смерти. Нормальная селезенка мыши весит приблизительно 0,09 г. (D) Типичные мазки периферической крови и костного мозга мышей с лейкемиями CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10.Полосы составляют 40 мкм для всех панелей. (E) Репрезентативные вестерн-блоты уровней di-me h4K79, гистона h4 и актина в отдельных CALM-AF10 (показан 1 образец из 3), CALM (520-583) -AF10 (показаны 2 образца из 3), NES ^CALM -AF10 (показаны 2 образца из 3) и Hoxa9 / Meis1 (показаны 2 образца из 3) лейкозов. Количественные данные представляют собой среднее ± SEM значений di-me h4K79, нормированных на гистон h4, от отдельных лейкозов (n = 3 для каждого). Статистический анализ был выполнен с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом множественного сравнения Даннета.Только Hoxa9 / Meis1 статистически отличался от CALM-AF10: * P <0,05. (F) Уровни транскрипта Hoxa были получены с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени и нормализованы к генам «домашнего хозяйства» GAPDH и β2M, а затем к лейкемическим клеткам Hoxa9 / Meis1 методом ΔΔCt. Результаты представлены в виде среднего значения ± SEM, полученного для 3 лейкозов CALM (520-583) -AF10, 3 NES ^CALM -AF10, 4 CALM-AF10 или 4 отдельных лейкозов Hoxa9 / Meis1. Статистический анализ выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа для каждого гена Hoxa с последующим тестом множественного сравнения Даннета.Только Hoxa9 / Meis1 статистически отличался от CALM-AF10: * P <0,05.

Рисунок 5

CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10 достаточно для индукции лейкемии in vivo с характеристиками, аналогичными лейкемии CALM-AF10 . (A) Кривая выживаемости Каплана-Мейера мышей, пересаженных пустым вектором (n = 4), CALM-AF10 (n = 10), CALM (520-583) -AF10 (n = 5) или NES ^CALM — AF10 (n = 7) трансдуцировал клетки костного мозга.Все мыши, трансдуцированные вектором, оставались свободными от лейкемии в ходе исследования и были умерщвлены через 320 дней после трансплантации. Кривая выживаемости мышей с вторичным трансплантатом (n = 5), которым вводили первичные лейкозы NES ^CALM -AF10 (2 первичных лейкемии, введенных 2 или 3 мышам), изображена пунктирной красной линией. (B) Процент GFP-положительных лейкоцитов (WBC) в периферической крови мышей, измеренный через 27 дней (CALM-AF10), 25 дней [CALM (520-583) -AF10] или 24 дня (NES ^CALM). -AF10) после трансплантации.(C) Вес селезенки мышей с лейкемиями CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10, измеренный во время смерти. Нормальная селезенка мыши весит приблизительно 0,09 г. (D) Типичные мазки периферической крови и костного мозга мышей с лейкемиями CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10. Полосы составляют 40 мкм для всех панелей. (E) Репрезентативные вестерн-блоты уровней di-me h4K79, гистона h4 и актина в отдельных CALM-AF10 (показан 1 образец из 3), CALM (520-583) -AF10 (показаны 2 образца из 3), NES ^CALM -AF10 (показаны 2 образца из 3) и Hoxa9 / Meis1 (показаны 2 образца из 3) лейкозов.Количественные данные представляют собой среднее ± SEM значений di-me h4K79, нормированных на гистон h4, от отдельных лейкозов (n = 3 для каждого). Статистический анализ был выполнен с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом множественного сравнения Даннета. Только Hoxa9 / Meis1 статистически отличался от CALM-AF10: * P <0,05. (F) Уровни транскрипта Hoxa были получены с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени и нормализованы к генам «домашнего хозяйства» GAPDH и β2M, а затем к лейкемическим клеткам Hoxa9 / Meis1 методом ΔΔCt.Результаты представлены в виде среднего значения ± SEM, полученного для 3 лейкозов CALM (520-583) -AF10, 3 NES ^CALM -AF10, 4 CALM-AF10 или 4 отдельных лейкозов Hoxa9 / Meis1. Статистический анализ выполняли с помощью однофакторного дисперсионного анализа для каждого гена Hoxa с последующим тестом множественного сравнения Даннета. Только Hoxa9 / Meis1 статистически отличался от CALM-AF10: * P <0,05.

Для дальнейшей характеристики лейкозов, индуцированных CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10, метилирование h4K79 было количественно определено и сравнено с AML, индуцированными совместной трансдукцией Hoxa9 и Meis1 (Hoxa9 / Meis1) .Эти лейкемии служат в качестве контроля, поскольку ретровирусная экспрессия эффекторных генов Hoxa9 и Meis1 повторяет болезнь, минуя вышестоящие эпигенетические изменения, регулирующие их экспрессию. Как показано на рисунке 5E, все лейкозные клетки CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10 демонстрируют пониженные уровни диметилирования h4K79 по сравнению с лейкозными клетками Hoxa9 / Meis1 (снижение на 55%, 30% , и 40% соответственно).

В отличие от лейкозных клеток Hoxa9 / Meis1, все лейкозные клетки CALM-AF10, CALM (520-583) -AF10 и NES ^CALM -AF10 демонстрируют повышенный уровень Hoxa5 , Hoxa7 , Hoxa11 и Hoxa10 уровней транскрипта (фиг. 5F).Следовательно, CALM NES, слитый с AF10, достаточен для активации экспрессии кластера Hoxa . Затем мы оценили эпигенетический статус локуса Hoxa в лейкозных клетках CALM-AF10 и NES ^CALM -AF10. Как наблюдалось в MEF, экспрессирующих CALM-AF10 (фиг. 4F), лейкозные клетки CALM-AF10 и NES ^CALM -AF10 демонстрируют обогащенное диметилирование h4K79 на промоторах гена Hoxa (фиг. 6A). Мы наблюдали аналогичный образец триметилирования h4K4, признак активной транскрипции, на промоторах Hoxa в клетках CALM-AF10 и NES ^CALM -AF10 (рис. 6В).Следовательно, слияние CALM NES с AF10 фенокопирует аберрантный эпигенетический и транскрипционный профиль, наблюдаемый при лейкемии CALM-AF10 .

Рисунок 6

h4K79 и h4K4 гиперметилированы по локусу Hoxa при лейкозах CALM-AF10 и NES ^CALM -AF10. ChIP-анализ ди-me h4K79 (A) и триметилированного h4K4 (B) в промоторных областях кластерных генов Hoxa .Амплификацию Hoxa измеряли с помощью ПЦР в реальном времени как процент ввода, затем нормализовали по контрольным лейкозным клеткам Hoxa9 / Meis1. Черные полосы представляют CALM-AF10, клетчатые полосы — NES ^CALM -AF10, а белые полосы — лейкемии Hoxa9 / Meis1. Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего, полученного для 3 отдельных лейкозов.

Рисунок 6

h4K79 и h4K4 гиперметилированы по локусу Hoxa при лейкемии CALM-AF10 и NES ^CALM -AF10. ChIP-анализ ди-me h4K79 (A) и триметилированного h4K4 (B) в промоторных областях кластерных генов Hoxa .Амплификацию Hoxa измеряли с помощью ПЦР в реальном времени как процент ввода, затем нормализовали по контрольным лейкозным клеткам Hoxa9 / Meis1. Черные полосы представляют CALM-AF10, клетчатые полосы — NES ^CALM -AF10, а белые полосы — лейкемии Hoxa9 / Meis1. Результаты представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего, полученного для 3 отдельных лейкозов.

Слитые белки, как было показано, опосредуют гематопоэтический онкогенез с помощью множества механизмов.Некоторые химерные слитые белки включают ДНК-связывающие факторы транскрипции (например, AML1-ETO или NUP98-HOXA9), кофакторы ^32,33 (например, перегруппировки MOZ или MN1-TEL), ^34,35 или белки, модифицирующие хроматин. (например, MLL-слияния), ³⁶ и кооптация свойств партнеров слияния приводит к аберрантной транскрипционной активности. Другие партнеры слияния предоставляют домены гомоолигомеризации, которые делают возможной димеризацию слитого белка, что приводит к усилению или появлению новых активностей (таких как PML-RARα или некоторые слияния MLL). ^37-39 Несколько эндоцитарных белков (например, CALM, EPS15 или CLTC) нацелены на хромосомные транслокации, и нарушение эндоцитоза было предложено в качестве механизма лейкемогенеза (обзор в Crosetto et al. ⁴⁰ и Lanzetti et al ^{). 41} ). Хорошо задокументированное участие CALM в эндоцитозе ^17,42 и его потенциальная транскрипционная роль в ядре ²⁰ привели нас к предположению, что одна из этих функций (или обе) могут быть вовлечены в онкогенность CALM-AF10.Однако наш структурно-функциональный анализ CALM выявил неожиданный и новый механизм лейкемической трансформации, который зависит от наличия NES.

Используя анализы иммортализации и трансплантации костного мозга, мы продемонстрировали, что NES внутри CALM (а.о. 544-553) является необходимым и достаточным для CALM-AF10-опосредованного лейкемогенеза. Эти находки дополняют наблюдения Deshpande et al, ⁵ , которые сообщили, что карбокси-конец CALM (aa 400-648) является достаточным для трансформации, управляемой CALM-AF10.Эти авторы приписывают свои находки наличию клатрин-связывающего домена на карбокси-конце CALM и пришли к выводу, что нарушение эндоцитоза может быть механизмом, с помощью которого CALM-AF10 является онкогенным. ⁵ Мы недавно определили, что клатрин-связывающий домен CALM охватывает аминокислотные остатки 583-652 на крайнем С-конце, который отличается от NES. ¹⁹ Аналогично, Stoddart et al. ²¹ показали, что эндоцитоз не нарушается в клетках CALM-AF10. Вместо этого эти авторы предположили, что гомоолигомеризация CALM-AF10 может опосредовать его потенциал трансформации, основываясь на способности последних 55 аминокислотных остатков CALM в CALM-AF10 (а.о. 593-648) способствовать димеризации. ²¹ Наше наблюдение, что CALM aa 540-557 или мотивы NES из гетерологичных белков достаточны для придания трансформирующего потенциала AF10, привело нас к выводу, что CRM1-зависимый NES представляет функциональный вклад CALM в CALM-AF10-опосредованный лейкемогенез и отличается от мотивов CALM, участвующих в эндоцитозе или олигомеризации.

Мы показали, что слияние 18-аминокислотных NES CALM в рамке считывания с AF10 (NES ^CALM -AF10) достаточно для иммортализации мышиных клеток-предшественников in vitro и индукции лейкемогенеза in vivo.Важно отметить, что лейкозы NES ^CALM -AF10 демонстрируют длительную латентность, тогда как большая часть CALM, охватывающая NES, слитую с AF10 [CALM (520-583) -AF10], полностью повторяет быстрое начало CALM-AF10 лейкемии (рис. 5А). Возможно, что более длинный CALM (520-583) -AF10 позволяет правильно складывать NES и / или способствует его общей стабильности. Также возможно, что CALM (520-583) -AF10 содержит дополнительный домен (ы), который способствует лейкемогенезу.Например, CALM содержит предполагаемый домен активации транскрипции (TAD), который охватывает 408-572 а.о. ²⁸ Дополнительные остатки TAD, присутствующие в CALM (520-583) -AF10, могут рекрутировать транскрипционные комплексы или напрямую взаимодействовать с регуляторными областями ДНК. Поскольку функция CALM TAD остается неизвестной, необходимы дополнительные исследования для выяснения его потенциального вклада в CALM-AF10-зависимый лейкемогенез. Важно отметить, что наша демонстрация того, что NES ^CALM -AF10 индуцирует лейкемогенез in vivo, предполагает, что CALM NES достаточен для опосредованной CALM-AF10 иммортализации.

CALM-AF10 лейкемии характеризуются глобальным снижением метилирования h4K79, и этот фенотип может способствовать лейкемогенезу за счет увеличения хромосомной нестабильности. ¹⁵ Здесь мы демонстрируем, что экспорт AF10 из ядра коррелирует с этим нарушенным эпигенетическим состоянием. Ранее предполагалось, что CALM-AF10 действует доминантно негативным образом на эндогенный AF10, регулируя глобальное гипометилирование h4K79. ¹⁵ Поскольку домен OM-LZ AF10 необходим и достаточен для CALM-AF10-опосредованной трансформации, CALM-AF10 может изменять субклеточную локализацию партнера по связыванию OM-LZ, DOT1L. Относительное исключение DOT1L из ядра может объяснить глобальную потерю метилирования h4K79, наблюдаемую в клетках, экспрессирующих CALM-AF10. Действительно, мы наблюдали, что CALM-AF10 и DOT1L совместно локализуются как в цитоплазме, так и в ядре (рис. 4D). Альтернативно, CALM-AF10, как было показано, изменяет локализацию и функцию другого взаимодействия OM-LZ, IKAROS, но последствия этой неправильной локализации не выяснены. ^43,44 Наконец, GAS41 является другим связывающим OM-LZ белком, который функционирует как компонент комплекса SWI / SNF, и его неправильная локализация может потенциально приводить к нарушению регуляции транскрипции. ⁴⁵ Необходимы дальнейшие исследования для определения эффектов ядерного экспорта CALM-AF10 на эндогенный AF10 и его известных партнеров по связыванию OM-LZ.

Было показано, что повышающая регуляция эффекторных гомеобоксных генов Hoxa опосредована DOT1L-зависимым метилированием h4K79 как при лейкозах, подвергшихся реорганизации MLL , так и при лейкозах CALM-AF10 . ^14,16 Наше открытие, что как гиперметилирование h4K79, так и активация гена Hoxa зависят от NES, происходящих из CALM (рис. 4E-F), является новым и интригующим. Поскольку NES, производные от CALM, опосредуют ядерный экспорт CALM-AF10, эффекты на локусы Hoxa могут быть косвенными, возможно, за счет неправильной локализации важных транскрипционных / эпигенетических регуляторов в цитоплазме. Однако Okada et al. ¹⁶ показали, что CALM-AF10 связывает локус Hoxa5 с помощью ChIP.Хотя нам не удалось воспроизвести эти находки (данные не показаны), возможно, что CALM-AF10 напрямую связывает хроматин, поскольку он подвергается ядерно-цитоплазматическому перемещению. Точно так же ядерная пора была охарактеризована как место активной транскрипции генов у эукариот. ⁴⁶ Следовательно, возможно, что NES, полученная из CALM, нацелена на CALM-AF10 на периферию ядра (через CRM1), где может происходить активация гена, специфичного для локуса Hoxa . Хотя точный механизм (ы), с помощью которого CALM-AF10 опосредует свои транскрипционные и эпигенетические эффекты, сложен, наши исследования LMB указывают на необходимость взаимодействия CRM1.Интересно, что другой лейкозный слитый белок, SET-NUP214, связывал как CRM1, так и DOT1L. ⁴⁷ Лейкозные клетки SET-NUP214 также имеют повышенную экспрессию гена Hoxa и локальное гиперметилирование h4K79, что поддерживает потенциальный онкогенный механизм с участием DOT1L и CRM1. ⁴⁷ Кроме того, новые партнеры слияния AF10, NAP1L1 , HNRNPh2 и DDX3X , были недавно идентифицированы при остром лимфобластном лейкозе Т-клеток. ^48,49 Подобно CALM, NAP1L1 и DDX3 X содержат охарактеризованные домены взаимодействия CRM1, ^50,51 и hnRNP h2 имеет предполагаемый NES.Следовательно, взаимодействие CRM1 может быть повторяющейся особенностью слитых белков лейкемии, подчеркивая его потенциальную роль в опосредовании лейкемогенеза. Необходимы дальнейшие механистические исследования, направленные на понимание роли взаимодействия CRM1 в лейкемогенезе.

Агрессивные злокачественные опухоли кроветворения, содержащие транслокаций CALM-AF10 , наблюдаются как у детей, так и у взрослых пациентов и связаны с плохим прогнозом.Улучшение исхода лейкозов CALM-AF10 зависит от разработки целевых методов лечения с повышенной эффективностью и пониженной токсичностью. Основываясь на нашем открытии, что иммортализация с помощью CALM-AF10 зависит от CALM NES, мы выдвигаем гипотезу, что NEI представляют собой инновационный подход к избирательному нацеливанию на эти злокачественные новообразования. Важно отметить, что мы показали, что человеческие лейкозные клетки, экспрессирующие CALM-AF10 , более чувствительны к лечению LMB, чем CALM-AF10 –отрицательные линии (рис. 7B-C).Кроме того, блокирование ядерного экспорта было предложено в качестве терапевтической стратегии против многих типов рака, основанных на различных механизмах действия, таких как предотвращение передачи сигналов через p53 или ядерный фактор κB. ^52,53 Фактически, LMB был протестирован в качестве противоопухолевого агента в клинических испытаниях фазы 1, но из-за ограничивающей дозу токсичности его дальнейшие исследования не проводились. ⁵⁴ Несмотря на опасения по поводу токсичности, нацеливание на ядерный экспорт остается привлекательной возможностью, и в настоящее время проходят испытания новые, более сильные и менее токсичные вещества. ⁵⁵ Следовательно, блокирование CRM1-зависимого ядерного экспорта является потенциальной терапевтической возможностью для пациентов с лейкемией CALM-AF10. Кроме того, может быть полезно разработать низкомолекулярный ингибитор, специфически направленный против NES CALM, чтобы избирательно блокировать ядерный экспорт онкобелка CALM-AF10.

Таким образом, происходящее из CALM NES наделяет AF10 трансформационным потенциалом посредством нарушения эпигенетического и транскрипционного состояния.Ядерный экспорт AF10 неправильно локализует часть DOT1L в цитоплазму, что коррелирует с глобальной потерей метилирования h4K79. Напротив, гиперметилирование h4K79 присутствует в локусе Hoxa и также зависит от присутствия NES, производных от CALM. Основываясь на этих результатах, мы предполагаем, что ингибиторы CRM1 могут представлять собой новый терапевтический подход для пациентов с лейкемиями CALM-AF10 .

Онлайн-версия этой статьи содержит дополнение с данными.

Расходы на публикацию этой статьи были частично оплачены за счет оплаты страницы. Таким образом, и исключительно для того, чтобы указать на этот факт, данная статья помечена как «реклама» в соответствии с разделом 18 USC 1734.

Авторы благодарят Майкла Армстронга, Орена Бехера, Лизу Кроуз, Чи Данга, Джонатана Холдемана, Корин Линардич и Роба Векслера-Рея за вдумчивые комментарии и предложения, Эрика Делабесса за предоставленную конструкцию CALM-AF10 и И Чжана за предоставление конструкция hDOT1L .

Эта работа была поддержана NCI R01 CA 109281 (D.S.W.), исследовательским грантом Св. Болдрика (D.S.W.), V Foundation / Applebee’s Grant (D.S.W.) и Hyundai Hope Grant (C.P.L.).

Мы находимся в затишье перед новой бурей инфекций и смертей от COVID-19

Смертей и инфекций от COVID-19, похоже, на данный момент замедлились, но по мере того, как мы начинаем выходить из своих домов в попытке вернуться к нормальной жизни , нам нужно приготовиться к тому, чтобы шторм вернулся.

Нация наблюдала, как Грузия, мой родной штат, только что прекратила действие закона о приюте на месте. Но в зависимости от того, насколько строго общественность практикует меры физического дистанцирования, общее количество смертей в штате, которое достигло 1300 в первую неделю мая, может колебаться от 6000 до 18000 к августу, а на пике пандемии количество новых инфекций. в день может составлять от 40 000 до 80 000 человек. Пиковая потребность в больничных койках может колебаться от 11 000 до 25 000; для коек интенсивной терапии от 1800 до 4000; а для вентиляторов от 900 до 1900.Эти потребности, вероятно, намного превысят возможности, которые могут быть доступны для пациентов с COVID-19 в штате.

Наше исследование указывает на нехватку в 14 координирующих больничных регионах в Грузии, особенно при низком или среднем соблюдении требований физического дистанцирования после отмены заказа на убежище на месте. В некоторых сценариях, даже если бы все доступные ресурсы больницы были использованы для лечения пациентов с COVID-19 на пике, этого все равно было бы недостаточно для большинства регионов.

В некоторых регионах смертельный дефицит может растянуться на несколько недель.Это еще раз подчеркивает важность строгого соблюдения добровольного укрытия на месте и физического дистанцирования после окончания действия государственного убежища.

МОДЕЛЬ ЗА ЭТИМИ ПРОЕКЦИЯМИ

Эти прогнозы основаны на агентной модели, которую мы разработали для прогнозирования распространения COVID-19 географически (на уровне переписи населения) и во времени (имитационная модель в этом документе следует структуре, аналогичной модели в двух из наши предыдущие статьи — здесь и здесь — о пандемическом гриппе).В отличие от моделей подбора кривой, моделирование на основе агентов позволяет нам моделировать прогрессирование заболевания (то, как болезнь протекает у человека в зависимости от возраста) и поведение (например, соблюдение рекомендаций физического дистанцирования) на индивидуальном уровне. Он фиксирует распространение болезни путем моделирования взаимодействия между людьми в домохозяйствах, на рабочих местах, школах и общинах, используя подробные данные, такие как размер домохозяйства, рабочий процесс и демографические данные населения.

В имитационной модели мы протестировали различные сценарии временного укрытия и добровольного карантина, а также закрытия школ с разной продолжительностью и меняющимися во времени уровнями соблюдения.Результаты модели показывают, что в течение первых 180 дней заболевания (начиная примерно с середины февраля), если бы не было вмешательства, процент инфицированного населения мог бы превысить 64 процента, а пик пришелся бы примерно на середину апреля. . Закрытие школ снижает этот процент примерно до 55 процентов и задерживает пик примерно на неделю. Другими словами, несмотря на их значительное влияние на общество, одного закрытия школ недостаточно, чтобы серьезно повлиять на распространение COVID-19.

ЧТО МЫ МОЖЕМ СДЕЛАТЬ?

Хотя на горизонте появляются обнадеживающие кандидаты в фармацевтические препараты, пока что нет доступных средств, способных замедлить или остановить COVID-19 — ни противовирусных препаратов, ни вакцины. Нашим основным оружием против этой очень заразной болезни в обозримом будущем является физическое дистанцирование (включая закрытие школ), укрытие на месте, изоляция людей, инфицированных этим заболеванием, и добровольный карантин.

Большинство школ закрыто в Соединенных Штатах на оставшуюся часть учебного года, и большинство штатов издали приказы о предоставлении убежища на месте в марте или апреле на четыре недели или дольше.Эти вмешательства замедлили распространение COVID-19. В наших моделях мы обнаружили, что укрытие на месте значительно помогает замедлить распространение болезни и отсрочить пик.

Это было хорошо, но тоже временно, и сейчас мы находимся на критическом этапе.

По мере того, как штаты начинают отменять заказы на убежище на месте, если очень строгое соблюдение правил физического дистанцирования нарушается, COVID-19 будет распространяться быстро и далеко. Это может помочь проанализировать эффективность каждой меры социального дистанцирования, и наша модель обнаружила особый потенциал в добровольном карантине.

НАСКОЛЬКО МОЖЕТ ПОМОЧЬ ДОБРОВОЛЬНЫЙ КАРАНТИН?

В рамках добровольного карантина все домохозяйства должны оставаться дома, если есть человек с симптомами простуды или гриппа — даже при отсутствии тестирования или подтверждения COVID-19 — до тех пор, пока все домохозяйство не избавится от симптомов. Наши исследования показывают, что соблюдение добровольного карантина оказывает огромное влияние на процент инфицированного населения и количество новых случаев заражения в день на пике COVID-19.После отмены четырехнедельного обязательного приюта на месте в Грузии процент инфицированного населения может колебаться от 28 до 46 процентов к августу, а пик может произойти где-то между июнем и августом, при высоком и низком уровне соблюдения с добровольным карантином соответственно.

Высокое соблюдение добровольного карантина задерживает пик и значительно снижает общее количество инфекций и смертей. Это снизит нагрузку на медицинских работников, больничные койки, койки интенсивной терапии, аппараты ИВЛ и другие ресурсы.

Однако мы хотели бы предупредить, что одного этого вмешательства недостаточно. В некоторых домохозяйствах могут быть люди, инфицированные COVID-19, даже если у всех членов домохозяйства нет симптомов; добровольный карантин не повлияет на такие домохозяйства, и они могут заразить других.

ПУТЬ ВПЕРЕД

COVID-19 угрожает почти всем аспектам человеческой жизни в том виде, в каком мы ее знаем, от общественного здравоохранения до цепочек поставок и экономики до взаимоотношений. Здоровье и благополучие населения имеют первостепенное значение, но также растет желание ослабить физическое дистанцирование, вернуться к нормальному состоянию по мере роста экономического и социального давления.

Хотя приюты на месте очень эффективны в сокращении распространения инфекции, они могут нанести ущерб обществу и экономике, если они будут оставаться на месте в течение длительного времени. В качестве альтернативы добровольный карантин нацелен только на домохозяйства с лицами с симптомами, поэтому количество людей, которые остаются дома в любой момент времени, значительно меньше при добровольном карантине — даже при высоких уровнях соблюдения — по сравнению с приютом на месте.

Легкого пути к нормальной жизни пока нет. Но по мере того, как мы движемся в новую реальность, мы должны постоянно следовать физическому дистанцированию, а также никогда не забывать, что бессимптомные люди все еще могут заражать других.Государства должны решительно выступать за добровольное укрытие на месте, добровольный карантин и другие меры физического дистанцирования. Наше коллективное терпение и приверженность продолжению физического дистанцирования спасут жизни и помогут нам вернуться в более здоровое и сильное общество, которое является основой сильной экономики.

Узнайте больше о вспышке коронавируса от Scientific American здесь, а также читайте статьи из нашей международной сети журналов здесь.

Ювелирные изделия и часы Позолоченные 18 карат Играющая пара Кристалл дельфина Ожерелье Цепочка с подвеской Ювелирные изделия Бижутерия

Позолоченное 18 карат Играющая пара Кристалл дельфина Ожерелье Кулон-цепочка Ювелирные изделия

18-каратное позолота Играющая пара Дельфин Кристалл Ожерелье Кулон Цепочка Ювелирные изделия, Покрытие Играющая пара Дельфин Кристалл Ожерелье Кулон Цепочка Ювелирные изделия Золото 18 карат, Цвет: золото, Гарантийное обслуживание, Если товар неисправен через 3 месяца, вы все равно можете отправить его нам, Кулон длина: 23 мм, в комплекте: 1 ожерелье, длина цепочки: 455 мм, легко сочетается с разнообразной одеждой, обработка: позолота, шоппинг — удовольствие быстрая бесплатная доставка Наслаждайтесь дешевыми скидками по конкурентоспособным ценам! Дельфин Кристалл Ожерелье Кулон Цепочка Ювелирные изделия Позолота 18K Играющая пара lovasiandras.ху.

18K позолоченные игральные пары дельфин кристалл ожерелье кулон цепи ювелирные изделия

Разработан как активный альпийский промежуточный слой от холода. Мы обещаем 30-дневный возврат денег за качество продукции или обслуживание, акриловая длинная шапка достаточно длинна, чтобы ее можно было сложить в манжету, и она является идеальной зимней шапкой для холодной погоды или повседневного использования. 000 часов и совместим с патроном для лампочки E12 (диаметр 12 мм). или смешайте и сочетайте с клочком цветной бумаги и подарочными пакетами или коробками разных размеров на любой случай. Брюки имеют удлиненный пояс и пуговицы для подтяжек. Позолоченные 18 карат Играющая пара Кристалл-дельфин Ожерелье-подвеска Ювелирные изделия цепи .Многоцелевой: можно использовать в спальне. Дата первого упоминания: 21 сентября. Особенно эффективна при повышенном трении. НОУТБУК. Убедитесь, что ваш маленький ученик подготовлен ко всему, что готовит для него школа. Прочтите ниже, чтобы узнать, что мы делаем с нашими кабелями, совместимыми с USB-портом питания. Европа (все страны) ✈ 5-7 дней, Позолоченные 18 карат Играющая пара Дельфин Кристалл Ожерелье Кулон Цепочка Ювелирные изделия , Мне нравятся цвета этой величественной рыбы кои, предназначенной для заваривания чая.обработка занимает 1 или более рабочих дней в зависимости от количества товаров в заказе, коричневые шелковые высокие чулки до бедра «Maple Tree» винтаж 1920-х годов. Размеры примерно 12 мм на 19 мм, не считая прыжкового кольца. Рубашка для сна, размер 36, Gossard Artemis, средний розовый, нейлон, короткие рукава, пуговица, спереди, воротник Питер Пэн, верх кровати, винтажная одежда для сна, свежевыстиранная из нашего магазина в Цинциннати. Позолоченные 18 карат Играющая пара Дельфин Кристалл Ожерелье Кулон Цепочка Ювелирные изделия . Ювелирные изделия из стерлингового серебра: Ссылка — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА возможна для соответствующих покупок. Предложение по размеру и высоте: 85 подходит для роста 37-41 дюймов (95-105 см).