Подложка солид 3 мм отзывы: Подложка под напольные покрытия ТМ Солид пенополистирол листовая 3мм

Подложка Подложка для ламината листовая Solid

Найдите ту плитку, которая нужна именно Вам! Мы поддерживаем огромный ассортимент, что бы ни терять, ни одного своего посетителя и каждому предложить то, что ему нравится. Любую плитку можно подобрать с помощью удоного фильтра в каталоге.

С точки зрения заработка, нам гораздо удобнее всегда продавать дорогую итальянскую плитку, но мы понимаем, что далеко не все покупатели могут позволить себе такую покупку. Поэтому в нашем ассортименте всегда широкий выбор плитки отечественных фабрик и производителей из ближнего зарубежья, чья продукция отличается невысокой ценой. Купите плитку, которая лучше всего подходит не только вашим желаниям, но и вашему бюджету. Нас, так же как и вас, очень раздражает, когда нам не перезванивают менеджеры интернет-магазинов. Поэтому мы перезваниваем всегда, включая те случаи, когда понимаем, что товара нет в наличии и продажу мы совершить не сможем. Звоните нам или заказывайте на сайте и будьте уверены, мы Вам перезвоним! Как правило, при заказе плитки до обеда вы сможете получить ее уже на следующий день. Минимальный срок доставки в нашем магазине 1 день. Не заставляйте себя ждать, закажите плитку и получите ее в кратчайшие сроки! Оплачивайте при доставке, не выходя из дома. Для вашего удобства мы предусмотрели возможность оплаты при доставке, поэтому нет никакой необходимости приезжать к нам заранее и вносить предоплату за покупку. Подробнее… Покупайте плитку по более приятным ценам, которые держать нам позволяет большой объем продаж и отсутствие гигантских арендных плат за торговые площади. В магазине BestCeramic.ru действует система скидок по дисконтным картам, которую Вы обязательно получите при покупке. Условия подробно…
Благодаря удобной системе заказа плитки, Вы можете получить ее, не выходя из дома. Совершая покупки онлайн  круглосуточно, Вам останется только принять плитку от нашего водителя-экспедитора. Оплата производится по факту получения плитки. Условия оплаты подробно… Самая распространенная ошибка при покупке плитки это неправильный расчет, когда ее попросту не хватает. А для магазина продавать одну-две плитки совершенно неудобно и не выгодно и далеко не все магазины это делают. Совершая у нас заказ, вы можете рассчитывать на то, что мы впоследствии вас не бросим и привезем недостающую вам плитку. Покупайте, не думая об ошибках, мы всегда поможем их исправить.Условия доставки Подробнее… Как бы нам не хотелось побыстрее и побольше продать, мы всегда честно предупреждаем о сроках доставки, о нюансах связанных с технологическими особенностями плитки, которые могут влиять на ее использование о том, что каждая партия плитки, выходящая из производства, имеет свой тон (а напольная еще и калибр). Поэтому нам практически всегда удается выполнять свои обещания, а когда этого не происходит, мы стараемся в кратчайшие сроки исправить ошибку.

Самой распространенной ошибкой при приобретении плитки является то, что покупатель не рассчитывает запас плитки на случаи подрезки или боя и приобретение недостающей является большой проблемой! Наши менеджеры-консультанты всегда помогут правильно рассчитать кол-во плитки, с учетом необходимого запаса на бой и подрезку при укладке. Советуйтесь с нами о количестве, мы поможем!

Если Вы хотите вернуть плитку, сделать это можно в течение 2-х недель с момента покупки. И хоть плитка и является товаром, отпускаемым на метры, а в законе о правах потребителя четко сказано, что такой товар возврату и обмену не подлежит. Мы всегда, без проблем, принимаем возврат, если нам сдают его полностью в том объеме, в котором мы его продали.

11 лучших подложек под ламинат

Обзор лучших подложек под ламинат из натуральных и искусственных материалов. Преимущества и недостатки каждого варианта, а также советы по выбору подложки по виду и толщине.

Какую подложку под ламинат лучше купить

В зависимости от материала изготовления, подложка может быть натуральной или искусственной. Наиболее распространенными вариантами подложек природного происхождения являются пробка и хвоя, из синтетических – востребованы пенополистирол и вспененный полиэтилен.

Натуральная подложка имеет более долгий срок службы и высокую цену. Искусственная куда доступнее.

В зависимости от особенностей помещения и чернового напольного покрытия, выбирают подложку с улучшенными характеристиками:

• теплоизоляцией;
• плотностью;
• звукоизоляцией;
• гидроизоляцией.

Важный критерий выбора – толщина подложки, которая варьируется от 2 до 10 мм. Оптимальный вариантом для большинства покрытий считается 2-3 мм.

Подложка может быть листовой и рулонной. Какую выбрать – зависит исключительно от личных предпочтений.

Рулонный материал быстрей укладывается, но требует более качественного скрепления, иначе она будет смещаться под финишным напольным покрытием.

Рекомендации:

Лучшие натуральные подложки под ламинат

Подложка из натуральных материалов имеет продолжительный срок службы. Она отлично поглощает шумы и является дышащим, экологически чистым покрытием. Цена у такой подложки, соответственно, высокая.

Стелить ее под дешевый ламинат, который она превосходит по сроку службы, нецелесообразно. А вот под дорогостоящие ламели такое решение является оптимальным, надежным и долговечным.

Steico «Underfloor»

4.9

★★★★★

оценка редакции

98%

покупателей рекомендуют этот товар

Древесноволокнистая листовая подложка от Steico предназначена для финишного покрытия, укладываемого «плавающим» способом.

Она изготавливается из прессованного волокна хвойных деревьев и смолы, которая выступает в качестве связующего элемента. Материал характеризуется высокой прочностью на сжатие, отличной гибкостью и эластичностью.

Подложка имеет диффузионную открытость – способность вбирать в себя лишнюю влагу. Она обеспечивает беспрепятственную циркуляцию воздуха, что способствует установлению оптимального микроклимата внутри помещения.

Underfloor способна устранять неровность в пределах 2–3 мм, в зависимости от толщины. Реализуется она упаковками по 15 шт. и имеет толщину в 3, 4, 5.5 или 7 мм.

Достоинства:

• Абсолютная натуральность;
• Диффузионная открытость;
• Высокая прочность;
• Гибкость и эластичность;
• Быстрый монтаж.

Недостатки:

Благодаря своей натуральности, подложка Steico Underfloor не выделяет токсичных паров и является гипоаллергенной. Подходит для помещений, где проживают дети.

 

Пробковая подложка «Корк»

4.9

★★★★★

оценка редакции

93%

покупателей рекомендуют этот товар

Рулонная пробковая подложка от компании «Корк» производится толщиной от 2 до 10 мм и шириной в 1 м. Она используется для укладки под ламинат и паркетную доску.

Материал характеризуется высокой плотностью и способностью восстанавливаться даже после повышенной нагрузки от тяжелой мебели и хождения.

Подложка «Корк» на 100% состоит из натуральной коры дуба. Она отлично подавляет шумы и имеет высокие теплоизоляционные характеристики. Способна скрывать небольшие дефекты чернового пола.

Достоинства:

• Несколько вариантов толщины;
• Высокие тепло- и шумоизоляционные свойства;
• Способность восстанавливаться;
• Экологичность.

Недостатки:

• Несовместима с системой «Теплый пол»;
• Имеет высокую цену.

Пробковая рулонная подложка от «Корк» предназначена для укладки в квартирах, частных домах и офисах.

 

Хвойная подложка Cezar

4.8

★★★★★

оценка редакции

90%

покупателей рекомендуют этот товар

Листовая подложка Cezar изготовлена из прессованной древесины сосны. Материал выпускается с толщиной листов в 4, 5 и 7 мм.

Благодаря пористой структуре подложка отлично поглощает звуковые волны, хорошо утепляет поверхность и препятствует скоплению конденсата на бетонной стяжке.

По отзывам покупателей, эта подложка отлично устраняет скрипение полов. Она проста в укладке и долговечна.

Достоинства:

• Натуральность;
• Звукоизоляция;
• Теплоизоляция;
• Предотвращение скрипов;
• Долговечность.

Недостатки:

• Не продается поштучно – только упаковками;
• Для влажных помещений требует дополнительной пароизоляции пленкой.

Экологически чистая и долговечная подложка от Cezar оптимальна для укладки в жилых помещениях.

 

Wicanders «Cork Sheet»

4.8

★★★★★

оценка редакции

88%

покупателей рекомендуют этот товар

Подложка изготовлена из пробки и реализуется в листах толщиной от 2 до 10 мм. Размеры плиток – 915х610 мм.

Материал способен скрывать незначительные неровности чернового пола. Он подходит для укладки на различные основания: бетон, дерево, ДСП и другие.

Подложка характеризуется высокой степенью термоизоляции и звукоизоляции. Она устойчива к нагрузкам и способна защищать замки ламелей от деформации.

Достоинства:

• Разнообразие толщины листов;
• Выравнивающие способности;
• Термоизоляция;
• Звукоизоляция;
• Простота укладки.

Недостатки:

• Несовместима с «Теплым полом».

Натуральная пробковая подложка от Wicanders имеет универсальное применение. Она подходит для укладки под ламинат, массивную доску и паркет.

 

Лучшие искусственные подложки под ламинат

Главное преимущество синтетических материалов – доступная цена. И хотя срок службы у подобных подложек немного меньше, чем у натуральных, они пользуются хорошим спросом, особенно при укладке на относительно ровное основание и под невысокий либо средний по классу ламинат.

Кроме того, искусственная подложка имеет более высокую устойчивость к влаге и не является пищей для грызунов.

Professional Series

5.0

★★★★★

оценка редакции

96%

покупателей рекомендуют этот товар

Композитная подложка Professional Series имеет уникальную трехслойную структуру, состоящую из шариков пенополистирола, размещенных между перфорированным и сплошным слоем пленки.

Ее главное достоинство – отличная защита от влаги, а следовательно, образования плесени и грибка. Материал создает вентилируемое пространство под ламинатом.

Подложка имеет неплохую шумоизоляцию и способна гасить звуки до 20 дБ. Высокая упругость и сопротивление деформации позволяет ей устранять дефекты основания в пределах 3 мм и делает долговечной.

Professional Series проста и удобна в укладке, так как имеет разметку и прозрачные клапаны для соединения полотен. Реализуется в рулонах площадью по 10 кв. м.

Достоинства:

• Уникальная структура;
• Высокая пароизоляция;
• Шумоподавление;
• Устранение неровностей;
• Удобный монтаж.

Недостатки:

• Высокая цена, как для искусственной подложки.

Подложка Professional Series подходит для любых помещений, включая ванную, кухню и другие комнаты с повышенным уровнем влажности.

 

Jermaflex «Topizol»

4.8

★★★★★

оценка редакции

89%

покупателей рекомендуют этот товар

Рулонная подложка из фольгированного вспененного полиэтилена является бюджетным вариантом для ремонта помещений. При этом она имеет отличные характеристики.

Благодаря фольгированному слою материал не пропускает влагу от бетонного основания, защищая финишное напольное покрытие от гниения и образования плесени.

Наличие металлизированной гидроизоляции у подложки Jermaflex устраняет необходимость стелить дополнительную пленку. Материал реализуется рулонами и может иметь толщину от 2 до 10 мм.

Достоинства:

• Низкая цена;
• Различная толщина;
• Фольгированный слой;
• Высокая влагостойкость;
• Простота монтажа.

Недостатки:

• Не подходит для системы «Теплый пол».

Jermaflex Topizol – это бюджетный вариант подложки под ламинат и другие покрытия.

 

4.8

★★★★★

оценка редакции

88%

покупателей рекомендуют этот товар

Подложка от Arbiton изготовлена из экструдированного пенополистирола и реализуется 3-миллиметровыми листами площадью в 6 кв. м. Она позволяет скрыть незначительные неровности основания до 2 мм.

Материал не имеет запаха и не выделяет токсические пары. Благодаря пароизоляционному слою и системе пазов, подложка способствует циркуляции воздуха, предотвращая образование плесени.

Материал характеризуется крайне простой укладкой. Подложка имеет ленту скотч, а также специальную разметку, позволяющую ровно отрезать лишние части строительным ножом.

Достоинства:

• Пароизоляционный слой;
• Наличие пазов;
• Лента скотч;
• Наличие разметки;
• Выравнивание поверхности.

Недостатки:

• Невысокий уровень шумопоглощения.

Подложка Secura Extra от Arbiton предназначена для укладки на полы со средней интенсивностью нагрузки.

 

«Тепофол» НПЭ

4.6

★★★★★

оценка редакции

83%

покупателей рекомендуют этот товар

Изготовленная из вспененного полиэтилена подложка является универсальным материалом, который применяется не только для напольных покрытий, но и для утепления, звукоизоляции стен и потолков, а также для наружных работ. Она реализуется в рулонах и может иметь толщину от 2 до 10 мм.

Несшитая молекулярная структура материала наделяет его высокими показателями паропроницаемости, звуко- и ударопоглощения. Подложка имеет низкую теплопроводность и небольшой процент остаточной деформации.

Достоинства:

• Звукопоглощение до 32 дБ;
• Ударопрочность;
• Универсальное применение;
• Паропроницаемость;
• Все варианты толщины.

Недостатки:

• Высокая степень горючести.

Подложка «Тепофол» может укладываться на любые основания из бетона, дерева, кирпича, пеноблока и других материалов.

 

Лучшие подложки под ламинат на полы с подогревом

Многие модели ламината подходят для укладки сверху на «теплый пол», и подложка для них должна использоваться соответствующая. Главный критерий выбора – высокая теплопроводность и устойчивость к нагреву.

Solid 1,8 мм

4.9

★★★★★

оценка редакции

94%

покупателей рекомендуют этот товар

Листовая подложка Solid толщиной в 1,8 мм имеет перфорированную структуру, что позволяет ей пропускать тепло от системы подогрева.

Имея небольшую толщину, она обладает неплохими демпфирующими свойствами, защищающими замки ламината от быстрого износа.

Кроме того, подложка обладает высокими звукопоглощающими свойствами благодаря повышенной плотности материала – она вдвое снижает шум шагов по ламинату. Solid имеет доступную цену и несложна в монтаже.

Достоинства:

• Умеренная цена;
• Высокая звукоизоляция;
• Увеличенная плотность материала;
• Перфорированная структура;
• Простота укладки.

Недостатки:

• Не выравнивает поверхность.

Подложка Solid 1,8 мм оптимальна для использования в многоквартирных домах.

 

Cezar «Expert Thermo Rapid»

4. 8

★★★★★

оценка редакции

90%

покупателей рекомендуют этот товар

Материал был разработан специально для использования совместно с системами подогрева пола. Подложка изготовлена из экструзивного пенополистирола и реализуется в виде листов 50х100 см толщиной в 3 мм.

Все они имеют специальные отверстия, которые отлично пропускают тепло, при этом не снижают демпфирующих свойств разделительного слоя.

Несмотря на отличные показатели устойчивости к нагрузкам и высокой теплопроводности, подложка имеет доступную цену.

Достоинства:

• Уникальная структура;
• Простота монтажа;
• Высокая теплопроводность;
• Высокие демпфирующие свойства;
• На удивление небольшая цена.

Недостатки:

• Невысокое шумопоглощение.

Подложка Cezar Expert оптимальна для относительно ровных полов с подогревом, не требующих усиленной звукоизоляции.

 

EcoHeat ПНП

4.6

★★★★★

оценка редакции

83%

покупателей рекомендуют этот товар

Рулонная подложка от EcoHeat изготовлена из вспененного полиэтилена. При небольшой толщине в 2 мм, она обладает отличной амортизацией, компенсирующей линейные расширения.

Материал характеризуется высокой влагостойкостью и способностью использования при повышенных температурах, свойственных для работы системы подогрева.

Достоинства:

• Влагостойкость;
• Отличная амортизация;
• Шумопоглощение;
• Небольшой эффект выравнивания;
• Доступная цена.

Недостатки:

• Не подходит для повышенных нагрузок на пол.

EcoHeat ПНП – бытовой вариант подложки, который подойдет для любой комнаты, включая кухню и санузел.

 

Если вы заметили ошибку в тексте, пожалуйста, выделите её и нажмите Ctrl+Enter

Какая подложка лучше под ламинат

Практичный и стильный ламинат – это недорогое и комфортное покрытие, которое быстро завоевало рынок. Его просто эксплуатировать, за ним просто ухаживать. Но немногие знают, что долговечность и внешний вид ламината – это на 90% заслуга качественного монтажа, где самое важное – грамотно выбрать подложку.

А выбирать ее правильно не по внешнему виду или стоимости, а исходя из того:

• На какое именно основание будет монтировать ламинат.
• Каковы параметры влажности и температуры.
• Есть ли перепады пола.
• Какой именно ламинат будет укладываться.

Все настолько серьезно, что производители ламината даже имеют право отказать в рассмотрении претензии по поводу ухудшения качеств напольного покрытия, если вы использовали «не ту» подложку. И лояльно большинство из них относятся только к португальской пробковой подложке и экструдированному полистиролу.

Зачем вообще ламинату подложка?

Главные функции любой подложки под ламинат – это влагопоглощение, звукоизоляция и выравнивание. Хорошая подложка действительно может сгладить некоторые неровности и незначительные перепады.

Итак, зачем ламинату влагопоглощающая подложка? Дело в том, что этот материал, по сути, состоит из многослойных щитовых панелей, которые на самом деле представляют собой спрессованную древесную пыль, покрытую с обеих сторон бумажным покрытием. И только с лицевой стороны ламинат имеет ламинированный декоративный слой, который хоть как-то защищен от влаги, тогда как основание с низу – крайне уязвимо ввиду своей пористости.

Звукоизоляционная функция также необходима, потому что ламинат – покрытие очень тонкое, и при укладке «плавающим» методом шумовой эффект при ходьбе будет еще тот. И это — только самое важное. Подложка на самом деле играет достаточно большую роль в будущем тепле и уюте.

Из какого материала лучше выбирать?

Итак, давайте разберемся с современными материалами и рассмотрим на предоставленных фото-инструкциях, как правильно такие подложки укладывать.

Вариант #1 — экологичная и долговечная пробка

Этот экологичный и приятный на ощупь материал обычно выбирают в качестве подложки под ламинат в спальни и детские комнаты. Пробка не гинет и не покрывается плесенью, служит долго, замечательно амортизирует шаг и защищает от шума. Самое ценное свойство пробковой подложки в том, что даже с годами она практически не портится.

Совет: будьте осторожны, выбирая пробковую подложку: если попадете на некачественную и дешевую, она будет крошиться. Причем эти крошки создадут собой бугорки, которые на глаз под пробкой определить невозможно, зато ламинат жалобно заскрипит уже в первые дни.

Сама же пробковая подложка в продаже встречается самая разная:

• Резинопробковая;
• Битумно-пробковая;
• Из пробковой крошки;
• Пробковое полотно.

Подробнее хочется сказать про битумно-пробковую подложку. Производится из посыпанного пробковой крошкой битума и крафт-бумаги. Воздухообмен у нее хороший, и при этом конденсат не образовывается. Главный недостаток пробковой подложки – дороговизна. Второстепенный – низкая влагоустойчивость. Поэтому, если помещение у вас отличается сыростью, то выбирайте резинопробковую подложку или с битумной пропиткой.

А вот как ламинат кладут на такую подложку:

Есть также один момент, о котором также не все знают: пробка обладает высокой жесткостью и высоким коэффициентом трения. И для нее подходит только очень ровное основание. Кроме того, такой параметр пробки может сыграть с вами злую шутку, если на ламинате стоит немало тяжелой мебели. Так доски практически лишены естественного движения, и даже при наличии зазоров покрытие просто вздуется.

Что же касается истинной экологичности пробковой подложки, то заметим, что только декоративные панели обладают таковой. У них – верхний слой цельный, а вот любая подложка состоит из гранул пробки, соединенных клеем. Поэтому, если из-за повышенной влажности помещения вы не можете проложить таковую – не зацикливайтесь. В принципе, тот же «Изолон» — вполне приемлемый аналог пробки в плане экологичности, но он при этом еще и дешевле. Только под саму пробковую подложку обязательно постелите полиэтиленовую пленку как пароизоляцию – этот материал боится влаги.

Вариант #2 — вспененный полипропилен

Этот материал не боится влаги и скрадывает любые неровности пола. Воздух в нем также вентилируется. Но под большую статическую нагрузку класть такую подложку нельзя – у нее полопаются пузырьки воздуха, и она станет разной по толщине. Есть еще один серьезный недостаток – непостоянная толщина и недостаточная шумоизоляция.

Вариант #3 — пенополистирол (для серьезных нагрузок)

Подложку из экструдированного полистирола сегодня активно выпускает и Россия, и Китай под самыми разными брендами. И у каждой продукции – свои характеристики. Эта подложна тоже не считается официально разрешенной производителями ламината. Но, если вы такую берете, то отдайте предпочтение маркам VTM или «Изополин» — о них больше всего можно услышать хороших отзывов.

Пенополистирол долговечен и выдерживает серьезные нагрузки. Он не пропускает влаги и способен обеспечить хорошую теплоизоляцию. Вот как его укладывают:

Минус такой подложки: в первые годы она даже обгоняет по своим качествам рулонную пробку, а вот через 6-7 лет уже теряет свои ценные свойства. Также эта подложка очень токсична при горении, при этом сам огонь по ней распространяется очень быстро. Будьте осторожны! Также у пенополистирола недостаточная выравнивающая способность, такую подложку можно класть только на идеально ровный пол.

Вариант #4 — хвойная подложка (ценная вентиляция)

Этот популярный материал приобретать нужно в виде плитки. Хвойная подкладка не такая гибкая, как пробка, но хорошо пропускает воздух. Т.е. «дышит».

Вариант #5 — фольгированная подложка

Этот материал создает эффект термоса, за что его и ценят. В специализированном магазине вы можете найти как односторонние подложки, так и двухсторонние.

Вариант #6 — полиэтиленовая пленка

Да, подложку из полиэтилена сегодня действительно используют. Буквально через три года пленка под ламинатом потеряет свои свойства, как и сам ламинат 21 класса, которого и в продаже уже нет. Но все-таки пол такой конструкции еще устраивается – для сдачи в эксплуатацию бюджетных объектов, где самое главное – внешний вид и дешевизна (плотность пленки – около 25 кг/м3, тогда как у пробки – 220 кг/м3.)

Только для этой цели подходит далеко не любая пленка – нужно брать ту, что толщиной 0,2 мм, в рулонах, и укладывать ее с 20-сантиметровым нахлестом. Здесь полиэтиленовая пленка сверху и внизу обеспечивает паронепроницаемость, а находящиеся между слоями гранулы из пенополистирола поглощают шумы. Причем между гранулами есть зазоры для случайной влаги.

Расстилать подложку нужно перпендикулярно панелям. Загибать на стены не нужно.

Вариант #7 — комбинированные и интегрированные подложки

В этом материале используется и полиэтилен, и пенополистирол. Если же вы устраиваете теплый пол, тогда выбирайте достаточно тонкую подложку, которая обеспечит нужную звукоизоляцию и защитит от влаги, но не станет препятствовать теплопередаче.

Некоторые мастера приспосабливают в качестве подложки под ламинат другие материалы. И в чем-то они бывают правы: например, вместо дорогой пробковой подложки можно положить те пробковые листы, что используются для вырезания подстаканников – дешево и сердито, и те же свойства. А бывают и проколы, когда под ламинат кладется совершенно не пригодный для этого материал. Если вы решили рискнуть подобным образом, помните: подложка должна быть бактерицидной, устойчивой к плесени и абсолютно не съедобной для насекомых и грызунов.

Есть еще интегрированные подложки — это каучук, который приклеен сразу к ламинату еще в заводских условиях (некоторые производители так делают) и покрыт тонким нетканым материалом. Он хорошо скользит по стяжке, не коробится и значительно убирает шум при ходьбе. Вы наверняка слышали о том, что некоторые фирмы выпускают ламинат с ценными шумопоглощающими свойствами, но цена его, естествен, намного выше.

Какой толщины должна быть подложка?

В народе существует миф: чем толще подложка под ламинат, тем лучше. И некоторые даже кладут ее в два слоя, чтобы добиться еще большей шумоизоляции и тепла. Но здесь кроется один важный негативный момент: такая подложка при точечной нагрузке (например, от стоящего тяжелого предмета или человека) может слишком сильно сжиматься, и доски даже могут сломаться, к сожалению.

Так, даже если подложка будет немного толще 3 мм, то со временем могут повредиться соединения ламелей, ведь ламинат не рассчитан на прогиб при ходьбе человека. И вот последствия: доски изгибаются, замки от этого быстро изнашиваются и появляются большие щели, от которых пол потом не просто скрипит – он «грохочет». Чем ровнее основание, тем тоньше можно брать подложку. Но все равно учитывайте уровень ее жесткости.

Вот правильная укладка подложки:

Что предлагает современный рынок?

Современные фирмы выпускают специальные подложки конкретно для ламината. Стоят они не мало, зато прочны, влагоустойчивы и хорошо задерживают тепло и звук. Давайте рассмотрим самые популярные из них.

Наиболее востребована сегодня хвойная подложка «Изоплат». В продаже вы найдете ее в виде листового волокнистого материала, который состоит из сосновой древесины. «Изоплат» способен впитывать в себя до 20% от собственного объема, не изменяя при этом ни своих изоляционных свойств, ни герметичности. Его аналог – эстонский продукт «Тихий ход».

Пробковой подложке плиты «Изоплат» в плане упругости и восстанавливающих качеств все-таки уступают. Кроме того, минимальная толщина этих плит – 5 мм, а потому о гарантии на ламинат можно будет забыть.

«Теплон» — листовой полистироловый материал, жесткий и обладающий хорошим уровнем звуко- и теплоизоляции. Но любые материалы с «гранулами воздуха» внутри плохо переносят постоянные динамические нагрузки и быстро портятся.

Фольгированный «Изолон» — это рулонная пенополиэтиленовая подложка нового поколения. В ее основе – вспененный пенополиэтилен и слой фольги. Итог: отменные теплоизоляционные свойства, пароизоляция и долговечность.

Польский продукт «Арбитон» состоит из экструдированного полистирола с дополнительной пароизоляцией. У этой подложки – однородная плотная структура, а укладка достаточно проста, не смотря на то, что «Арбитон» считается профессиональным материалом.

Подложка Tuplex финского производства. Ее главный козырь – это высокая эластичность, которая хорошо скрывает дефекты и неровности пола, оставаясь при этом достаточно устойчивой к деформации. При этом у подложки еще и высокие вентиляционные свойства, позволяющие излишки влаги между покрытием и основанием убирать естественным способом. На вид такая подложка – как двухслойная полиэтиленовая пленка, где промежуточным слоем служат пенопластовые гранулы. Причем нижний слой у пленки с отверстием, пропускающим влагу – благодаря этому не образовывается конденсат. Тuplex выбирают часто ввиду способности этой подложки значительно понижать шум – вплоть до 20 дБ. Также у этой подложки хорошие теплоизоляционные и пароизоляционные свойства.

Подложка «Парколаг» производится в России, и по своей структуре и свойствам отчетливо напоминает заморский «Туплекс». Положительных качеств много, но есть и огорчающие нюансы: подложка приходит в вывернутом виде, и после раскрытия рулонов на полу ее нужно переворачивать. А это уже не легко – при неосторожном обращении отсыпается пробковая крошка.

Знаменитый «Изошум» — отечественная подложка из экструдированного пенополистирола, которая снижает шум до 50%. Выглядит она как жесткая листовая, которую достаточно удобно использовать. Вот как:

Как правильно укладывать подложку?

При укладке подложки самое главное – избежать совпадения ее швов и швов покрытия. Стелить листовую подкладку нужно в шахматном порядке, не внахлест, а закреплять малярным скотчем. Рулонную же подложку нужно укладывать с нахлестом на стены, на следующие полосы уже без нахлеста – только с закреплением скотча. Понимаете, почему так? Соединенные внахлест стыки попросту создадут неровную поверхность, на которую класть ламинат уже нельзя.

Все другие виды — по прилагаемой инструкции на видео.

Нужна ли под подложкой пленка?

А теперь еще один важный момент. Не смотря на рекламу большинства производителей о том, что их подложка – лучшая гидроизоляция, все равно крайне желательно дополнительно положить на пол полиэтиленовую пленку. Причем берите таковую с параметрами не меньше 200 мкм. Если упустите такой момент – потом ни одна ваша претензия фирмами рассматриваться не будет.

Но, что интересно, порой строители убеждают не класть пленку между подложкой и полом – мол, там быстро заведется плесень. И зерно истины в этом есть: если вы не просушите бетон перед укладкой ламината – так и будет. Но это уже – прямое нарушение строительных норм, последствием чего может быть не только грибок. Просто приобретите влагомер и измерьте основание.

Проверить, не возникнет ли в будущем подобных проблем, можно так: нарежьте пленку 1х1 м и положите на пол. Приклейте скотчем по краям, создав полную герметичность временной подложки. Если на утро пленка осталась сухой – все будет в порядке.

А более подробно об укладке самого ламината вы можете прочитать в других наших статьях.

Оцените статью: Поделитесь с друзьями!

Синтетическая подложка-гармошка SOLID 3мм SLIDG003

Безопасность олайн платежей

Для оплаты (ввода реквизитов Вашей карты) Вы будете перенаправлены на платежный шлюз ПАО СБЕРБАНК. Соединение с платежным шлюзом и передача информации осуществляется в защищенном режиме с использованием протокола шифрования SSL.

В случае если Ваш банк поддерживает технологию безопасного проведения интернет-платежей Verified By Visa или MasterCard SecureCode для проведения платежа также может потребоваться ввод специального пароля. Настоящий сайт поддерживает 256-битное шифрование. Конфиденциальность сообщаемой персональной информации обеспечивается ПАО СБЕРБАНК. Введенная информация не будет предоставлена третьим лицам за исключением случаев, предусмотренных законодательством РФ.

Проведение платежей по банковским картам осуществляется в строгом соответствии с требованиями платежных систем МИР, Visa Int. и MasterCard Europe Sprl.

Доставка товаров осуществляется в течение 1-2-х дней с момента поступления заказа в наш транспортный отдел. Время доставки оговаривается заранее. Водитель свяжется с Вами за 30-60 минут до приезда. Доставка производится ежедневно, по предварительному согласованию.

Доставка в регионы России осуществляется транспортными компаниями. Мы доставляем товар в офис транспортной компании, и после доставки Вы забираете свою покупку в Вашем регионе.

Помимо этого Вы можете заказать и сопутствующие услуги, в число которых входит доставка покупки до квартиры.

Сопутствующие услуги по доставки

Наименование работ	единицы измерения	цена
подъем 1 упаковки при наличии лифта
Ламинат	1 уп.	50 р.
Паркетная доска	1 уп.	100 р.
Плинтус	1 уп.	50 р.
Подложка	1 уп.	50 р.
подъем 1 упаковки без лифта
Ламинат	1 уп.	50 р.этаж.
Паркетная доска	1 уп.	100 р.этаж
Плинтус	1 уп.	50 р.этаж
Подложка	1 уп.	50 р.этаж

 

Обмен и возврат товара в нашем магазине.

Покупка товара в интернет-магазине, при условии, что Вы не видели его в живую, зачастую сопряжена с риском, что товар не подойдет Вам по цвету, габаритам или по какой-либо другой причине. В связи с этим, во избежание рисков, мы предлагаем Вам возможности по обмену и возврату купленного в нашем интернет-магазине товара.

Возврат при доставке товара.

При доставке товара Вы можете, аккуратно вскрыв любую упаковку, убедиться в том, что выбранный декор соответствует заказанному, подробно рассмотреть товар и потрогать его на ощупь. В случае, если товар не подходит Вам по каким-либо причинам, Вы в праве просто отказаться от него не оплачивая его стоимость и стоимость доставки. (В соответствии со ст. 26.1 Закона «О защите прав потребителей»).

Возврат после доставки товара.

В случае, если Вы оплатили и получили товар и водитель-экспедитор уехал, но Вы всё таки решили, что товар не соответствует Вашим ожиданиям (не подходит по цвету, габаритам, фактуре и т.д.), Вы имеете право вернуть товар нам без объяснения причин в течение 7 дней не считая день получения товара, или вернуть и обменять товар в течение 14 дней не считая день получения товара. Единственным условием возврата явлется целостность заводской упаковки. Вам также необходимо будет предоставить документы подтверждающие покупку. (В соответствии со ст. 26.1 Закона «О защите прав потребителей»).

Прием претензий по качеству, возврат и обмен товара производятся по адресу:

ТЦ «Гелиос», г. Королёв, пр. Космонавтов, 20а, 3-ий этаж, павильон № 314.

С понедельника по пятницу с 12-20 часов.

Закажи и получи подарок

Получите эти позиции бесплатно при покупке Синтетическая подложка-гармошка SOLID 3мм SLIDG003

Подложка Solid Termo 3 мм, листовая 5м2 в Краснодаре

При покупке кварц-виниловой плитки DeArt 50% клея Kilto в подарок

Линолеум роликами — доставка по городу до подъезда бесплатно.

Характеристики:

Толщина:

3мм

Материал:

Полистирол

Вид:

листовая

Количество в упаковке:

0 м2

Место производства:

Россия

Быстрая покупка

Расчет на месте Гарантия и возврат

Доставка Оплата

Условия доставки:

Доставка по Краснодару, Краснодарскому краю и Крыму осуществляется нашей собственной транспортной службой. При отправке в другие регионы России, либо в случае срочного заказа — мы используем любую федеральную транспортную компанию по Вашему выбору.

Подробная информация об условиях доставки:

Другие товары этого раздела

Наши акции

Закажите керамическую плитку и получите дизайн-проект за 1 день!

ВЫГОДА

• реалистичный проект вашего помещения
• вашему мастеру будет проще работать

ВЫГОДА

• при покупке комплекта товаров для ванной комнаты вы получаете индивидуальные скидки

При покупке кварц-виниловой плитки DeArt 50% клея Kiilto в подарок.

ВЫГОДА

• Экономия денежных средств
• Экологично и надежно

При покупке линолеума рулоном – доставка по городу до подъезда бесплатно.

ВЫГОДА

• Экономите с квадратного метра до 35%

При покупке межкомнатных дверей скидка на ручки до 30%

ВЫГОДА

• Существенная экономия денежных средств.

Обратитесь к консультанту и узнайте свою скидку

ВЫГОДА

• при покупке входной двери скидка от 5% до 15% на межкомнатные двери

Покупая диван, получаете скидку 15% на обеденный стол.

ВЫГОДА

• Существенная экономия денежных средств.

При покупке товаров из любых 3-х категорий: двери, напольные покрытия, керамическая плитка, керамогранит, сантехника, доставка по городу до подъезда бесплатно.

Подложка под напольные покрытия

Продавцы и маркетологи активно навязывают массовому потребителю необходимость приобретения подложек и приписывают последним несуществующие функции, вплоть до тепло- и звукоизоляции. Далеко не каждый в огромном потоке поступающей информации способен вычленить разумное зерно и задать себе простой вопрос: а нужна ли мне подложка под напольное покрытие?

Какие функции на самом деле выполняет подложка

Подложка под замковым напольным покрытием лишь гасит колебания самого пола

Запомните одно простое правило: подложка необходима только в том случае, если в доме, квартире или офисе вы используете жесткое свободнолежащее напольное покрытие с замком типа «клик-дроп», «клик-клик» или «шип-паз». К ним относятся:

• ламинат;
• паркетная доска;
• композитная древесноволокнистая плита;
• штучный паркет.

По сути, у подложки есть лишь одна ключевая функция – она выполняет роль демпфера. Это общее название для устройств и материалов, которые гасят механические колебания.

Более наглядно функцию демпфера проще всего показать на примере ламината. Ламели этого напольного покрытия жесткие по структуре. Когда при укладке вы соединяете их замками, на полу образуется своеобразный экран. Иными словами, 10–20 квадратных метров смонтированного ламината превращаются в подобие мембраны барабана.

И такой пол будет греметь, даже если на него уронить небольшой предмет вроде игрушечного кубика из пластика. При этом грохот от падения будете слышать не только вы, но и соседи снизу. Несложно представить, какой шум поднимется, если по ламинату будут передвигать мебель или ходить на каблуках. Чтобы гасить подобные колебания в ламинате, и используют подложку.

Многие задаются вопросом: нужна ли подложка под ковролин или линолеум? Как правило, подложка – материал довольно мягкий, как линолеум и ковролин. Положите листок бумаги на твердую поверхность и попробуйте проткнуть ее карандашом. Скорее всего, у вас ничего не получится. А теперь сделайте то же самое с бумагой, уложенной, например, на поролон. Даже от небольшого нажатия на листе появится дырка. Точно так же и мягкое напольное покрытие, уложенное на мягкую подложку, вскоре покроется дырами и вмятинами, значит и использование ее под такие покрытия неоправданно.

Какой толщины должна быть подложка

Такая дыра на поверхности ламината, скорее всего, следствие того, что под покрытие положили слишком толстую подложку

Изначально, когда только начали выпускать напольные покрытия, рекомендованная толщина подложки под ламинат составляла 2 мм, для паркетной доски – 3 мм. Со временем ее стали увеличивать до 5–7 мм. Хотя нужды в этом никакой нет, толщина 2–3 мм – оптимальна. И это ограничение не случайно.

Вспомним о мягкой структуре подложки. В процессе эксплуатации подложка усаживается, сминается и продавливается, из-за чего могут возникнуть перепады по высоте пола. Многие потребители пытаются заранее это компенсировать, укладывая толстую подложку или еще хуже – тонкую в несколько слоев. Это огромная ошибка!

Со временем в мягкой подложке под участками интенсивной нагрузки образуются пустоты. Чем толще слой подложки, тем больше пустоты, в которые будет продавливаться напольное покрытие. Из-за неравномерности напольного покрытия могут поломаться замки.

Толщина подложки в 2–3 мм предотвратит образование обширных пустот и изменения высоты напольного покрытия.

Некоторые производители ламинатов прописывают в гарантийных условиях строгое правило: если потребитель использует подложку толщиной более 3 мм, то гарантия на напольное покрытие не распространяется. И в том, что на полу появились дефекты, будет виновата не фирма-производитель, а нерадивый покупатель.

Подложка НЕ является звукоизолятором

Еще одна причина, по которой многие стремятся положить под напольное покрытие подложку потолще, – это ее якобы звукоизолирующие свойства. Но напомним еще раз! Подложка гасит лишь шум в самом покрытии, например при ходьбе. Если вы собрались звукоизолироваться, к примеру, от шумных соседей снизу, используя подложку, то откажитесь от этой идеи. Материал в 2–3, 5 и даже в 7 мм не способен поглощать шум, и вы будете слышать каждое слово соседей.

Подложка НЕ сохраняет тепло

Ни одна, даже самая качественная и дорогая подложка, не сделает пол теплее и уж тем более не избавит вас от шума с нижних этажей

Еще одни популярные заблуждения, связанные с использованием подложки для напольных покрытий, это – выравнивание пола за счет нее и теплоизоляция.

Уже стало понятно, что подложка не может быть выравнивающим элементом из-за своей мягкости и эластичности. Компенсировать неровности с помощью подложки невозможно. При укладке напольного покрытия необходимо просто соблюдать основное из правил – подготовить ровное основание с минимальными перепадами по высоте (2 мм на 1 кв. метр).

Что касается теплоизоляции. Вспомните, правильная толщина подложки 2–3 мм. При таких значениях материал физически не может выполнять роль теплоизолятора. Здесь все зависит от коэффициента теплопроводности самого напольного покрытия. Чем он ниже, тем теплее комфортнее будут тактильные ощущения от пола.

Нужна или нет подложка под кварц-винил

Кварц-винил – это напольное покрытие, для которого подложка абсолютно не нужна

Несмотря на то что замковый кварц-винил Fine Floor – свободнолежащее напольное покрытие, подложка под него не требуется. Дело в том, что за счет входящих в структуру кварц-винила слоев – это эластичный материал. Такое покрытие не создает колебаний на поверхности пола, следовательно, необходимости в демпфере нет.

Но стоит признать, что переосмыслить годами навязанные лжефункции подложки потребителю трудно и он на 100 % уверен, что она ему понадобится, даже если в качестве напольного покрытия будет использовать кварц-винил.

Что ж, если очень хочется постелить под кварц-виниловую плитку дополнительный слой, пожалуйста. Но использовать тогда уж специализированную подложку для LVT-покрытий. Она отличается от обычных следующими показателями:

1. Толщина – 1,5 мм.
2. Высокая плотность и твердость, что особенно важно для кварц-винила. Это покрытие эластичное, и укладывать его необходимо на твердое основание.
3. Специальная поверхность антислип, защищающая напольное покрытие от сдвига по горизонтали.

Виды подложек

Если вам необходима подложка под напольное покрытие, избегайте слишком дешевых – они прослужат считанные недели

Сейчас в продаже можно найти разные подложки для напольных покрытий. Популярными среди них являются:

1. Вспененный полиэтилен. Самая дешевая и, увы, недолговечная подложка, которая плохо выдерживает нагрузки и быстро истончается.
2. Экструдированный пенополистирол. Дешевый материал – с плотностью 50 кг/м³ выдерживает более высокие нагрузки, чем полиэтилен. Но лучше использовать подложку с плотностью 100 кг/м³, она не будет проминаться под большим давлением.
3. Пробковые подложки. Дорогой материал. Популярен среди тех, кто хочет свести к минимуму наличие синтетических материалов в доме. Такие подложки наиболее устойчивы к механическим нагрузкам, но пробка со временем усаживается и начинает крошиться.
4. Листовые хвойные подложки. Специалисты по напольным покрытиям не рекомендуют такие подложки, потому что их толщина начинается от 5 мм. А это, как мы уже выяснили, превышает норму для монтажа напольного покрытия.
5. Каучуковые подложки. Самые дорогие и самые качественные. Изначально были созданы под LVT-покрытия. Эти подложки устойчивы к сжатию, у них маленькая толщина и поверхность антислип.

Если вы выбираете экономвариант подложек для LVT-покрытий (кварц-винил), обратите внимание на материал на базе экструдированной пенополистирольной плиты. Толщина такой подложки 1,5 мм, а сверху для надежности наклеен фольгированный слой со свойствами антислип.

Что нужно запомнить о подложках в 4 пунктах

Запомните эти 4 вещи и используйте подложки правильно.

1. Необходимы только под свободнолежащие жесткие покрытия.
2. Основная роль – гасить механические колебания в напольном покрытии.
3. Кварц-винил Fine Floor – эластичный материал, и подложка под него не нужна.
4. Подложки не выравнивают поверхность, не поглощают шум и не сохраняют тепло.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Прямая оценка связывания субстрата с нейротрансмиттером: натриевым симпортером LeuT с помощью твердотельного ЯМР

Существенные изменения:

1) Надежность интерпретации данных ЯМР.

Главный вывод этой работы, то есть наличие только одного связанного лейцинового сайта, в значительной степени основан на одномерных спектрах ЯМР довольно ограниченного отношения сигнал / шум. Это особенно верно для рисунка 2, где с учетом базовой линии отношение сигнал / шум составляет примерно 4: 1 (а не так, как заявлено на рисунке 1, 21: 1).Хотя данные, показанные на рисунке 2, похоже, были записаны с аналогичным временем сбора данных, отношение сигнал-шум, по-видимому, значительно варьируется в зависимости от наилучшего отношения сигнал / шум для мутанта L400S.

В результате «предварительная нормализация» пика 38 ppm сигналов основной цепи NH относительно пика 38,2 ppm вызывает сомнения, а модуляция сигнала при резонансе 38 ppm для 3 образцов сравнима с уровнем шума. Почему авторы не провели более длительные эксперименты для получения лучшего отношения сигнал / шум? Кроме того, сигнал 15N мутанта F253A относится к спектру с наименьшим соотношением сигнал / шум и заявленным значением 0.Сдвиг пика на 2 ppm может легко исчезнуть при небольшом изменении фазовой коррекции. Даже если этот сдвиг действительно присутствует, он, вероятно, меньше собственной ширины линии ЯМР.

Мы полностью осознаем, что интенсивности пиков в наших спектрах невелики. Хотя было бы очень хорошо с лучшим отношением сигнал / шум, мы уже довели до предела количество времени ЯМР, используемое для записи одного одномерного спектра. Спектры, представленные в статье, были усреднены по сигналу в 6 блоках по 60K сканирований.Магнит перенастраивали перед каждым блоком сканирования, в результате на каждый одномерный эксперимент уходило примерно 64 часа. Следовательно, увеличение отношения сигнал / шум в два раза потребует не менее 256 часов эксперимента, что, по нашему мнению, было бы слишком много. Это может привести к значительной дестабилизации образца.

Данные, представленные на рисунке 1, ясно демонстрируют отсутствие дополнительных сайтов связывания лейцина, которые заселены более чем на 5% относительно сайта S1 и которые имеют разницу химического сдвига более 30 Гц (0.04ppm) по сравнению с сайтом S1.

На рисунке 2 показаны спектры вариантов F253A и L400S. Мы не получили столько кристаллизованного белка для этих вариантов, как для LeuT WT, и отношение сигнал / шум для пиков S1 в этих спектрах действительно ниже, чем для спектра WT (4: 1 и 11: 1, соответственно). Однако пики резкие, а их положение хорошо определено (собственная ширина линии ~ 30 Гц). Мы согласны с рецензентами, что наше представление данных может быть улучшено. На исходном рисунке мы обработали данные с уширением линии на 100 Гц, скрыв разрешение.Чтобы решить эту проблему, мы представили данные на вставке к рис. 2 с уширением линии всего на 1 Гц. Кроме того, на рис. 2 — дополнение к рисунку 2 мы построили спектры мощности и выровняли интенсивности трех конструкций, чтобы продемонстрировать, что разница в 0,2 ppm не может быть объяснена незначительными фазовыми ошибками.

2) Общая значимость и значение по отношению к предыдущей работе.

MAS-ЯМР использовался для изучения белков, встроенных в протеолипосомы, на протяжении десятилетий, и остается неясным, почему такие эксперименты не проводились здесь.Поскольку субстрат остается маркированным, они должны быть легко доступны. Для обозревателя такие данные значительно улучшили бы общую значимость этого исследования, потому что они позволили бы в конечном итоге сравнить данные детергента и липидного бислоя на атомном уровне (см. Quick et al., 2012).

Препараты протеолипосом

очень подходят для большинства исследований мембранных белков MAS-ЯМР, и мы действительно пробовали этот подход для связывания субстрата, но безуспешно. Как показано на Рисунке 1 — Рисунке в приложении 3, замороженные или полностью твердые образцы приводят к тому, что свободный лейцин полностью доминирует в спектре.При записи данных о протеолипосомах при комнатной температуре мы не видим никакого сигнала в экспериментах на основе CP от субстрата, что может быть результатом большой гибкости или слишком низкой чувствительности (липиды будут составлять большую часть материала в роторе ssNMR, чтобы сохранить функциональность транспортера).

В микрокристаллических образцах нет несвязанного лейцина, так как не наблюдаются сигналы в очищенном от калия белке, который служит нашим отрицательным контролем. Наконец, микрокристаллические образцы имеют значительно улучшенное разрешение (больший порядок) по сравнению с жидкими детергентными / липидными препаратами, что имеет решающее значение для наших выводов.Чтобы прояснить эти моменты, мы перефразировали текст, который теперь выглядит следующим образом:

«Для достижения достаточно узкой ширины линии сигналов ЯМР и во избежание любого сигнала от несвязанного лейцина, мы изготовили микрокристаллические образцы LeuT (Рисунок 1 — Приложение 2 к рисунку) и провели эксперименты ЯМР на основе кросс-поляризации (CP) при температурах выше точка замерзания. Во всех других протестированных препаратах (замороженные, лиофилизированные и замороженные протеолипосомы) сигнал от несвязанного лейцина полностью доминировал в спектрах (Рисунок 1 — рисунок в приложении 3A-B).”

3) Поскольку в литературе описан мутант S1 как способный связывать субстрат, но с более низким сродством, авторы приписывают пониженную амплитуду пониженному сродству к субстрату, но не подтверждают это утверждение, измеряя сигнал при высоком сродстве. концентрация субстрата. Это измерение важно провести, и будет важно увидеть, изменится ли химический сдвиг или нет.

Мы благодарим рецензентов за это ценное предложение.Как было предложено, мы выполнили эксперимент для F253A при концентрации свободного субстрата 1 мМ (рисунок 2 — приложение к рисунку 3). С этой целью мы понимаем, что четвертый абзац результатов и обсуждения делает ненужный акцент на небольшом изменении интенсивности. Наш вывод о том, что связанный лейцин воспринимает изменения в локальном окружении S1 (вызванные мутацией F253A) и, следовательно, связан в S1, основывается в первую очередь на различиях в химическом сдвиге сигналов лейцина между LeuT WT и F253A.Сравнение интенсивностей сигналов основано на предварительной нормировке, основанной на резонансах естественного обилия, которые не подходят для заключения о тонких различиях в аффинности, как также отмечалось выше.

В совокупности мы изменили абзац на:

«В спектре F253A 1D ¹⁵ N мы наблюдали натрий-зависимое связывание субстрата с химическим сдвигом 38,4 ppm и немного меньшей интенсивностью сигнала по сравнению со спектрами WT (рис. 2C).Сдвиг F253A был постоянным как для высоких (1 мМ), так и для низких (5 мкМ) концентраций лейцина (Рисунок 2 — приложение к рисунку 3). Что наиболее важно, разница химического сдвига ~ 0,2 ppm для наблюдаемого пика связанного лейцина демонстрирует, что на лиганд влияет местное окружение сайта связывания S1 ».

4) В последнем предложении авторы без надобности смягчают свой вывод, вероятно, пытаясь быть «политкорректными». Если предположить, что предложенный эксперимент подкрепляет их вывод, предложение может выглядеть примерно так: «Наши данные с использованием нового подхода к определению связывания субстрата подтверждают идею о том, что LeuT имеет единственный центральный сайт связывания».

Последний абзац результатов и обсуждения теперь гласит:

.

«Основываясь на незначительном изменении химического сдвига у мутанта F253A (S1) и полностью неизмененном сигнале для мутанта L400S (S2), мы делаем вывод, что наблюдаемый связанный лейцин находится в сайте связывания S1, таким образом подтверждая идею о том, что LeuT демонстрирует один единственный центральный сайт связывания ».

https://doi. org/10.7554/eLife.19314.016

Метагеномика ферментированных продуктов питания выявляет связанные с субстратом различия в таксономии, детерминантах, связанных со здоровьем и устойчивостью к антибиотикам.

% PDF-1.4 % 281 0 объект > эндобдж 283 0 объект > поток 2020-03-12T12: 42: 04-05: 002021-03-25T21: 41: 26-07: 002021-03-25T21: 41: 26-07: 00itext-paulo-155 (itextpdf.sf.net-lowagie. com) application / pdf

Метагеномика ферментированных пищевых продуктов выявляет связанные с субстратом различия в таксономии, детерминантах, связанных со здоровьем, и детерминантах устойчивости к антибиотикам

uuid: 97365ae6-1dd1-11b2-0a00-c40827fd5800uuid: 97365ae9-1dd1-11b2-0a00-6a0000000000 конечный поток эндобдж 269 ​​0 объект > эндобдж 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 0 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 3 0 obj > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 2 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 4 0 obj > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 3 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 5 0 obj > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 4 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 6 0 obj > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 21 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 7 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 23 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 8 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 25 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 9 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 27 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 10 0 obj > / MediaBox [0 0 595. 32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 29 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 11 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 30 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 12 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 31 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 13 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 33 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 14 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 39 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 15 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 42 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 16 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 45 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 17 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 47 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 18 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 55 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 19 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 59 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 20 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 63 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 21 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 68 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 22 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 80 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 23 0 объект > / MediaBox [0 0 595. 32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 94 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 24 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 100 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 25 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 101 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 26 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 102 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 27 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 103 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 28 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 104 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 29 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 106 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 30 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 107 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 31 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 108 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 32 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 109 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 33 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 110 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 34 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 111 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 35 0 объект > / MediaBox [0 0 595.32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 112 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 36 0 объект > / MediaBox [0 0 595. 32 841.92] / Parent 1 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / StructParents 113 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 37 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 38 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 39 0 объект > / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 40 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 41 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 42 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 43 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC] / XObject >>> / Type / Page >> эндобдж 44 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 45 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 46 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 47 0 объект > / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Type / Page >> эндобдж 425 0 объект [428 0 R] эндобдж 426 0 объект > поток HWmOFa? Т.е. {ИНДЖЕРУ 0un2ϦWcfNxrBH + FGxo`, oX

Оценка биомеханики роговичного субстрата и его влияние на поддержание и дифференцировку эпителиальных стволовых клеток

BSM показывает переход от более мягкого лимба к более жесткой центральной передней части роговицы

Установка BSM, используемая в этом исследовании, позволила визуализация погруженной роговицы человека (рис.1), который должен выполняться на всем диапазоне 12 мм и на глубине 3 мм роговицы с высоким разрешением (рис. 1b), скоростью (0,01–1 с на измерение) и точностью (дополнительный рис. 1). Этот подход облегчил идентификацию множества важных биомеханических особенностей. Во-первых, это показало, что у лимба в целом были более низкие значения сдвига частоты Бриллюэна, что указывало на то, что он был более податливым, чем центральная роговица (рис. 1b). Во-вторых, он выявил наиболее частые сдвиги (т. Е. Наиболее жесткую ткань) в прерывистом субэпителиальном слое центральной роговицы толщиной 10-15 мкм (рис.1в), что, вероятно, соответствует слою Боумена ¹¹ . Наконец, он показал, что этот слой жесткого матрикса отсутствует в лимбе (рис. 1d). Существенные различия в сдвиге частоты Бриллюэна между передней областью центральной роговицы и лимбом побудили к количественной оценке этих областей (рис. 1e). Сканирование поперечных срезов Бриллюэна в центральной части роговицы показало многослойный эпителий толщиной ~ 50 мкм (рис. 1c) со средним значением ± S.D. частотный сдвиг 6,37 ± 0.09 ГГц (рис. 1e) и базальные столбчатые клетки, представляющие жесткие ядра, как было предсказано ранее ¹⁴ , за которыми следуют слой Боумена толщиной 10-15 мкм и самая передняя строма со сдвигами на 6,66 ± 0,04 и 6,53 ± 0,04 ГГц, соответственно (рис. 1д). Напротив, лимбальный эпителий глубиной 40–60 мкм (рис. 1d) и 6,34 ± 0,14 ГГц сопровождался матриксом со значительно более низким частотным сдвигом (6,24 ± 0,09 ГГц), за которым, в свою очередь, следовала ткань, показывающая несколько более высокие сдвиги ( 6,40 ± 0.14 ГГц соответственно; Рис. 1e), что, вероятно, соответствует продолжению стромы роговицы под лимбом (Рис. 1b) ²⁸ .

Рис. 1

Лимб роговицы обладает отчетливыми механическими свойствами. a Схематическое изображение спектромикроскопа Бриллюэна (твердотельный лазер DPSS с лазерной диодной накачкой; поляризационный светоделитель PBS; четвертьволновая пластина QWP; одномодовое волокно PM-SMF с сохранением поляризации), показывающее конфокальный микроскоп , фильтр упругого рассеяния, спектрометр VIPA и образец в его иммерсионной среде.Целые человеческие роговицы, сохраненные неповрежденными после энуклеации, были погружены в Carry-C для сохранения естественной толщины, гидратации и прозрачности ткани (вставка) во время спектромикроскопии Бриллюэна (BSM). b Типичное изображение всего органа X — Z сканирований частотных сдвигов Бриллюэна от здоровой интактной роговицы человека ( n = 3). Спектры Бриллюэна были получены с шагом образца 20 мкм на поперечном сечении 12 × 3 мм (600 × 150 = 9 × 10 ⁴ точек) X – Z , что соответствует полной ширине и глубине роговицы, соответственно.Эти сканирование с высоким разрешением выявило поперечные полосы с частотными сдвигами высокого уровня Бриллюэна, в основном в задней строме и простирающиеся под углом к ​​средней или передней области ткани, что, вероятно, соответствовало ламеллярным волнам, которые, как считается, защищают ультраструктуру и форму стромы от внешних механических воздействий. шоки и последующее повышение внутриглазного давления ⁶⁵ . c Представитель Y — Z сканирование сдвигов частоты Бриллюэна центральной роговицы, выполняемое каждые 2 раза.5 мкм, демонстрируя отчетливый эпителий (Ep; глубина = 0–50 мкм), субэпителиальный слой (Sub; 50–65 мкм) и строму (St;> 65 мкм), а также расположение слоя Боумена (стрелка). d Представитель Y — Z — сканирование частотных сдвигов Бриллюэна лимба роговицы, выполняемое каждые 5 мкм, показывая эпителий (глубина = 0–50 / 60 мкм), субэпителиальный слой (60–120 мкм), и строма (> 120 мкм). e Измерения BSM, проведенные через переднюю область центральной роговицы и лимба, были статистически проанализированы (двухфакторный дисперсионный анализ; 100 индивидуальных измерений на область в каждом эксперименте) вместе со средним значением (центральная линия) ± S.Значения D. (усы) из трех независимых экспериментов ( n = 3; ** p <0,01 и *** p <0,001). Распределение значений сдвига было одинаковым для отдельных роговиц, но различалось в центральной части роговицы и в . limbus

Соответственно, различие в частотных сдвигах между эпителием и субэпителиальным матриксом непосредственно под ним было менее четким в лимбе, чем в центральной роговице (Рис. 1c и d). Лимб также показал более широкий диапазон распределения значений сдвига частоты Бриллюэна во всех своих слоях, тогда как центральная роговица характеризовалась однородными биомеханическими свойствами внутри каждого слоя (рис. 1e), профиль которого соответствует профилю из предыдущих исследований ²³ . Четкое различие между механически неоднородным лимбом и более правильной центральной роговицей было более очевидным при сканировании с очень высоким разрешением (дополнительные рисунки 1 и 2) и при альтернативных точках обзора (дополнительные видео 1 и 2) и постоянно наблюдалось на всех роговицах. анализируются независимо от пола или возраста доноров. Такой характер распределения, вероятно, был обусловлен бороздчатой ​​топографией лимба и наличием многочисленных структур, таких как Палисады Фогта, фокальные стромальные выступы и лимбальные крипты и / или ямки (Дополнительный фильм 1), особенно много в верхнем и нижняя конечность, но в меньшей степени на височной и носовой стороне роговицы ^2,29,30,31 (дополнительный рис.2). Более того, сканирование Бриллюэна с высоким разрешением также выявило множественные карманные области в лимбальном эпителии, которые демонстрировали значительно меньшие сдвиги по сравнению с их непосредственным окружением (Рис. 1d; Дополнительный Рис. 3a). Трехмерное сканирование Бриллюэна показало, что эти карманы состоят из множества сферических единиц диаметром 10–12 мкм (дополнительный фильм 2), которые совместимы, размер ³² и биомеханически ⁸ , с LESC, окруженными более жесткими клетками и матрицей.

BSM и иммунофлуоресценция показывают LESC, расположенные на мягком лимбальном матриксе

Важно отметить, что эти лимбальные карманы, идентифицированные с помощью BSM, также представляли местоположение клеток, коэкспрессирующих ABCG2, CK15, ядерный β-катенин и ΔNp63 (рис. 2a – c; дополнительные Рис. 3b), маркеры, согласованно связанные с LESC ^33,34,35 . Напротив, CK3 / 12-положительные эпителиальные клетки из центральной роговицы были отрицательными по лимбальным маркерам (Fig. 2a-c), указывая на то, что они составляли более дифференцированный эпителий.Совместное расположение областей низкого бриллюэновского сдвига с иммуноанатомическим лимбом было дополнительно подтверждено геометрией его особенностей (дополнительный рис. 3), а также экспрессией компонентов ВКМ и соответствующих клеточных рецепторов (рис. 2). ). Распределение сдвига низкого уровня Бриллюэна в лимбальном субэпителиальном матриксе (рис. 1e), классически идентифицируемом как конъюнктивальная строма и теноновая капсула ²⁸ , хорошо коррелировало с коллаген-I-положительным / коллаген-V-отрицательным соединительной тканью непосредственно под резидентными LESC (рис.2а – в). Более того, локальное распределение ламинина-γ3, характерного маркера базальной мембраны лимба ³⁶ , наряду с сильной экспрессией интегрина-α9, временной амплифицирующей клетки / маркера LESC ³⁷ , показало, что эта область соответствует лимбу роговицы. (Рис. 2d). Значения низкого сдвига Бриллюэна также хорошо коррелировали со структурными особенностями ткани, ранее охарактеризованными как состоящие из менее компактных коллагеновых пластинок с нерегулярно расположенными, разветвленными и переплетенными коллагеновыми пучками ^38,39 .Напротив, расположение CK3-положительных эпителиальных клеток (рис. 2e) хорошо коррелировало с областями центральной роговицы с наивысшими значениями сдвига Бриллюэна (рис. 1b). Эти области, как было установлено, состоят из повсеместно распространенных компонентов базальной мембраны роговицы или конъюнктивы, таких как collagen-VII ¹⁰ и ламинин-1 ³⁶ , но не ламинин-γ3 (Fig. 2d, e). Кроме того, матрикс под центральным эпителием роговицы был сильно положительным как по коллагену-I, так и по коллагену-V (рис.2). Этот отличительный состав играет важную роль в диаметре коллагеновых фибрилл и пластинчатой ​​организации стомы роговицы ⁴⁰ , что, в свою очередь, имеет решающее влияние на прозрачность ткани и модуль упругости ^9,41 . Количественная оценка сигнала также подтверждает характерный паттерн экспрессии маркеров как в лимбе, так и в центральной части роговицы (рис. 2f). Взятые вместе, эти результаты показали, что в роговице человека LESC населяют ткани, которые значительно мягче по сравнению с тканями, поддерживающими дифференцированные эпителиальные клетки, таким образом составляя нишу с различными биомеханическими, а также биохимическими / биомолекулярными профилями.

Рис. 2

Резидентность LESC соответствует лимбальным участкам с заметно более мягкими механическими свойствами. Репрезентативные конфокальные иммунофлуоресцентные микрофотографии маркеров эпителиальных клеток роговицы и компонентов внеклеточного матрикса были использованы для трехмерной реконструкции лимба и центральной части роговицы. Экспрессия лимбальных маркеров ABCG2 ( a ), CK15 ( b ) и ΔNp63 ( c ) экспрессировалась лимбальными эпителиальными клетками, поддерживаемыми коллаген-I-положительным / коллаген-V-отрицательным матриксом, но не посредством центральный эпителий роговицы ( a — c ).Такие маркеры, как CK3 ( a ), β-катенин ( b ) и интегрин-α3β1 ( c ) показали более высокую экспрессию в центральном эпителии роговицы. Гистохимическое различие между центральной роговицей и лимбом было дополнительно подтверждено маркерами базальной мембраны и соответствующими рецепторами. Лимб показал прерывистое распределение ламинина-1 по сравнению с центральной роговицей и специфическую экспрессию ламинина-γ3 и интегрина-α9 ( d ). Напротив, центральный эпителий роговицы был положительным на CK3 + 12 и коллаген-VII ( e ).Ядра клеток детектировали с помощью DAPI. f Экспрессия маркера была определена количественно и представлена ​​как среднее значение ± стандартное отклонение. из всех трех независимых экспериментов ( n = 3; *** соответствует p <0,001 после однофакторного дисперсионного анализа). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. Масштабные линейки, 100 мкм

Жесткость субстрата контролирует фенотип эпителиальных клеток роговицы in vitro

Неожиданно различные свойства между центральной роговицей и лимбом, наблюдаемые с помощью BSM, укрепили нашу гипотезу о том, что биомеханика играет роль в контроле фенотипа эпителиальных клеток роговицы ¹⁴ .Более жесткие особенности центральной роговицы подтверждают представление о том, что биомеханический дифференциал (т. е. градиент или ступенчатое изменение жесткости субстрата) играет решающую роль в дифференцировке эпителиальных клеток роговицы посредством механотрансдукции ^14,42 . В самом деле, несколько патологий, нарушающих целостность роговицы, в настоящее время управляются с помощью перекрестного связывания коллагена, когда жесткость центральной роговицы ²³ (но не лимба) позволяет восстановить здоровый дифференцированный эпителий ⁴³ .Напротив, в лимбе клетки, находящиеся в базальном эпителиальном слое, преимущественно экспрессируют инактивированную форму YAP, что свидетельствует о сниженном воздействии механических воздействий ¹⁴ . Более того, аберрантная жесткость лимба (например, из-за фиброза) связана с патологиями, ведущими к потере стволовых клеток ⁴⁴ . Предполагая, что различия в модуле ткани (между лимбом и центральной роговицей), описанные здесь, имеют жизненно важное значение для функции роговицы / гомеостаза, тогда разумно рассматривать манипуляции с жесткостью субстрата как эффективный терапевтический подход для стимулирования / восстановления функции LESC в поврежденной роговице.Таким образом, мы разработали стратегию исследования реакции LESC на податливость поверхности, сначала используя модель in vitro.

Ранее для этой цели использовались гели коллагена-I высокой плотности (имитаторы тканей) с разным уровнем жесткости за счет пластического сжатия ^45,13 . Теперь мы исследовали предпосылку, что жесткость геля коллагена можно регулировать локально с помощью местного применения раствора коллагеназы типа I (рис. 3a). Было показано, что коллагеновые гели, обработанные в течение 60 минут, частично перевариваются, причем ферментативное расщепление ограничивается участками, пропитанными коллагеназой (рис.3b, обработанный по сравнению с необработанным), и действует через всю толщину матрицы без уменьшения толщины геля (рис. 3b) или нарушения его структурной целостности (дополнительный рис. 4a – c). В частности, морфология коллагеновых фибрилл была неотличима между обработанными и необработанными гелями (дополнительный рис. 4b, c) и сравнима с таковой в литературе ⁴⁶ . Более того, это частичное расщепление не повлияло на среднюю шероховатость поверхности гелей (дополнительный рис. 4c), таким образом представляя нанотопографические особенности, существенно более плоские, чем те, которые, как было показано ранее, влияют на фенотип LESC ^47,48 .Однако коллагеназа значительно снизила плотность геля с потерей веса в сухом состоянии на 33 ± 16% и увеличила гидратацию на 83 ± 4% после 60-минутной обработки (дополнительный рис. 4d), что указывает на то, что фермент способен проникать через прессованные гели, несмотря на нанесение. местно. Более низкий объем коллагена и более высокая гидратация геля в зависимости от продолжительности лечения также соответствовали значительному снижению модуля упругости (дополнительный рис. 4e, f), при этом гели, обработанные в течение 60 минут, представляли среднее значение E = 0.7 ± 0,1 МПа, что почти на порядок ниже по сравнению с гелями, обработанными имитацией ( E = 5,2 ± 1,2 МПа) (рис. 3в).

Рис. 3

LESC-подобным фенотипом можно управлять посредством тонкой модуляции механических свойств коллагеновых субстратов. a Схематическое изображение метода лечения коллагеназой, используемого для регулирования жесткости сжатых коллагеновых гелей. Коллагеновые гели высокой плотности, прессованные пластмассой, размягчали раствором коллагеназы типа I в четко определенных областях (кольцевая, полукруглая или вся поверхность геля) в течение до 60 мин. b Анализ плотности сжатого коллагенового геля после обработки коллагеназой. Области, соответствующие обработанным коллагеназой коллагеновым гелям, показали повышенную прозрачность при визуализации в светлом поле (верхняя левая панель; масштабная линейка 5 мм) и более низкую плотность коллагена по сравнению с необработанными областями, на что указывает определение нижнего коллагена-I при иммунофлуоресцентной конфокальной микроскопии (верхняя правая панель; масштабная линейка, 50 мкм). Конфокальное сканирование Z (нижняя панель) продемонстрировало, что разница в интенсивности сигнала между обработанными и необработанными участками не ограничивалась поверхностью, что указывает на то, что коллагеназа в растворе действовала на всю глубину сжатого коллагена, поддерживая определенную зону обработки. . c Средняя частота ± S.D. модуля упругости E (МПа) обработанного (оранжевый) и необработанного гелей (синие столбцы), рассчитанного в трех независимых экспериментах с использованием спектроскопии сила-расстояние ( n = 3). Гистограммы частот обработанных и необработанных гелей использовали для расчета гауссовых кривых методом нелинейной регрессии (оранжевая и синяя области соответственно) с соответствующими значениями E = 0,7 ± 0,4 и 4,8 ± 3,5 МПа. d Влияние жесткости субстрата на экспрессию CK3 (дифференцировка) и CK15 (маркер белка LESC) в клетках, выращенных в течение 4 недель на обработанных и необработанных участках коллагеновых гелей (зеленое окрашивание) после нормализации общего числа клеток (красное окрашивание) , и представлено как среднее ± S.D. из трех независимых экспериментов ( n = 3; ** и *** соответствуют p < 0,01 и 0,001 после однофакторного дисперсионного анализа, соответственно). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. e Создание псевдолимба. Клетки, растущие на кольцевых смягченных участках (неделя 0), экспрессировали более высокие уровни CK15 по сравнению с клетками с высоким содержанием CK3, растущими на необработанной (более жесткой) центральной области коллагеновых гелей, до 4 недель в культуре (шкала, 5 mm)

Эта разница в податливости геля представляет собой важный результат, поскольку впоследствии было показано, что она влияет на фенотип эпителиальных клеток роговицы.LESC, выделенные из тканей роговицы человека и выращенные на размягченных (обработанных) коллагеновых гелях, показали значительно повышенную экспрессию CK15 (маркер лимбальных стволовых / предшественников) и снижение экспрессии CK3 (дифференцированный маркер роговичного эпителия) как на уровне транскрипции, так и на уровне белка (рис. 3d; дополнительная информация). Рис. 5a), с четко определенным паттерном, ограниченным границами ферментативного лечения (Рис. 3d), и без индуцированной экспрессии провоспалительных факторов ^49,50,51 (Дополнительный Рис. 5b).Важно отметить, что клетки на гелях, обработанных коллагеназой, также показали значительное снижение YAP, как с точки зрения общей экспрессии, так и с точки зрения ядерной локализации (nYAP) (дополнительный рис. 5c), подтверждая предыдущие доказательства того, что более мягкие субстраты способствуют фенотипу LESC посредством ключевой YAP-зависимой механотрансдукции. сигнальные пути ¹⁴ . Более того, эти клетки сохраняли характерную для LESC морфологию с диаметром 10-12 мкм и высоким соотношением ядра к цитоплазме (Supplementary Fig. 5c). Напротив, морфология клеток на необработанных гелях была ближе к морфологии базальных эпителиальных клеток из центра роговицы ³² .

Эти результаты показали, что ферментативное расщепление может производить точно контролируемые, локализованные различия в жесткости гелей коллагена высокой плотности, что приводит к удалению до одной трети исходного содержания коллагена внутри гелей без изменения их объема. наноструктура ⁴⁶ или нанотопография ⁴⁸ , а затем поддерживать недифференцированные LESC. Таким образом, мы затем использовали лечение коллагеназой для создания кольца из более мягкого коллагена (представляющего лимб, показав BSM, что эта ткань значительно мягче), окружающего более жесткую область (представляющую центральную роговицу).Клетки, впоследствии выросшие на обработанной области внешнего кольца (псевдолимбус), экспрессировали более высокие уровни CK15, тогда как клетки в центральной, необработанной области гелей показали более высокую экспрессию CK3 (фиг. 3e). Соотношение между CK3-позитивными и CK15-позитивными клетками увеличивалось после 4 недель культивирования, в основном из-за увеличения стратификации клеток с течением времени. Однако поддержание экспрессии CK15 с помощью LESC на коллагеновых гелях в целом было значительно выше, чем на субстратах с бесконечной жесткостью (т. е.е. пластика культуры ткани) на эквивалентных стадиях культивирования (дополнительный рис. 6). Более того, эти эффекты не зависели от присутствия каких-либо потенциальных криптических эпитопов, экспонируемых обработкой коллагеназой (дополнительный рис. 7).

Жесткость субстрата контролирует фенотип эпителиальных клеток роговицы ex vivo

Основываясь на этих результатах in vitro, применение коллагеназы может представлять собой эффективное и безопасное лечение, помогающее восстановить соответствующий уровень податливости тканей больной (более жесткой) конечности и, таким образом, способствовать Обслуживание и функционирование LESC.Коллагеназа также может использоваться в центральной части роговицы для изменения механических свойств ее матрицы в сторону получения более податливой, подобной лимбу окружающей среды. Другими словами, коллагеназа может быть использована для удлинения или даже реструктуризации «нового» лимба на периферии роговицы и, таким образом, предоставления резидентным или трансплантированным LESC подходящей альтернативной механической нишей. Чтобы проверить эту возможность, мы применили коллагеназу ex vivo к четко разграниченным центральным областям недавно энуклеированной роговицы человека (дополнительный рис.8) и проанализировали эффект смягчения методом BSM (рис. 4а). Как было предсказано на основании исследования пластически сжатого коллагенового геля, местное нанесение коллагеназы на роговицу человека привело к более низким сдвигам частоты Бриллюэна в обработанных коллагеназой, но не в ложно обработанных областях роговицы (рис. 4a), и без потери точность (дополнительный рис. 8b). В частности, обработка коллагеназой значительно снизила сдвиг частоты Бриллюэна в центральном субэпителиальном и переднем матриксе стромы по сравнению с контролем (рис.4b), при этом удивительным образом сохраняя слои эпителия на месте, хотя и в менее равномерном распределении (рис. 4b, правая панель). Примечательно, что сдвиг частоты Бриллюэна от обработанного субэпителиального матрикса центральной роговицы (6,45 ± 0,13 ГГц) был статистически аналогичным и представлял аналогичные вариации с таковым для субэпителия из контрольной (необработанной) лимба (6,34 ± 0,07 ГГц). ) (Рис. 4в). Это указывает на то, что лечение коллагеназой может смягчить центральную роговицу до уровня податливости, подобного лимбу.

Рис. 4

Смягчение ткани роговицы коллагеназой увеличивает экспрессию лимбальных маркеров во время реэпителизации ex vivo. a Типичный образец всей роговицы X — Z сканирование сдвигов частоты Бриллюэна, измеренных при расстоянии между образцами 20 мкм от здоровой интактной роговицы человека после обработки коллагеназой ( n = 3). Вставки соответствуют ( b ) областям центральной роговицы, смягченным коллагеназой (обработанным) или оставленным необработанным (контроль), проанализированным при сканировании с очень высоким разрешением с использованием расстояния выборки 2.5 мкм, показывая отчетливый эпителий (Ep), субэпителиальный слой (Sub) и строму (St), а также расположение слоя Боумена (белая стрелка). Этот подробный анализ свидетельствует об утрате более жесткого слоя Боумена (черная стрелка) и снижении частотных сдвигов Бриллюэна как в эпителии, так и в строме в результате лечения коллагеназой. c Сдвиг частоты Бриллюэна от передней части обработанной (белые) и контрольной (серые полосы) областей центральной роговицы и лимба.График представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение. измерений эпителия, субэпителия и стромы в трех независимых экспериментах (100 индивидуальных измерений на каждую отдельную область на эксперимент; n = 3; ns соответствует p > 0,05 и *, **, и *** до p <0,05, 0,01 и 0,001 после двухфакторного дисперсионного анализа, соответственно). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. d Репрезентативные конфокальные иммунофлуоресцентные микрофотографии (трехмерная реконструкция) распределения ламинина-1 (зеленый) и коллагена-VII (красное окрашивание) в центральной части роговицы до (вверху) и после обработки коллагеназой (центральная панель) и после реэпителизации (нижняя панель). e Типичные конфокальные иммунофлуоресцентные микрофотографии (трехмерная реконструкция) размягченной коллагеназой центральной роговицы после реэпителизации. Эпителиальные клетки, повторно заселяющие размягченную роговицу, экспрессировали ABCG2 и CK15 (лимбальные маркеры; зеленый), демонстрируя более низкую экспрессию CK3 + 12 и β-катенина (маркеры дифференцировки; красное окрашивание) по сравнению с клетками, растущими на более жестких, необработанных роговицах (контроль). f Эпителиальные клетки экспрессировали интегрин-α9 и депонировали ламинин-γ3 при выращивании на смягченных коллагеназой субстратах роговицы, но не на необработанной центральной части роговицы (контроль).Ядра клеток детектировали с помощью DAPI во всех трех независимых экспериментах. Масштабные линейки, 50 мкм

Измененные механические свойства обработанной коллагеназой центральной роговицы частично были вызваны деградацией богатого коллагеном матрикса передней стромы, включая слой Боумена (рис. 4b). Однако коллагеназа была столь же эффективна в смягчении нормального лимба роговицы (где слой Боумена отсутствует), при этом локализованное лечение ex vivo значительно снижало жесткость матрикса (дополнительный рис.8в), а именно на уровне субэпителия (рис. 4в). Конфокальный иммунофлуоресцентный анализ показал, что базальная мембрана в центральной части роговицы также была затронута, представляя большие пробелы в распределении коллагена-VII и ламинина-1 после обработки коллагеназой (рис. 4d). Тем не менее, после тщательной обработки с помощью промывки как обработанная, так и контрольная центральная роговица успешно служила ростовым субстратом ex vivo для LESC, поддерживая реэпителизацию (рис. 4e) и повторное отложение базальной мембраны (рис.4г). Подобно их поведению на коллагеновых гелях, клетки, выросшие на смягченных участках центральной роговицы, продолжали экспрессировать лимбальные маркеры, такие как CK15 и ABCG2, особенно в базальных слоях нового эпителия (Fig. 4e). Более того, они депонировали фокусированный ламинин-γ3 и экспрессировали интегрин-α9 (Fig. 4f), два маркера, характерных для лимбальной ниши ^36,37 . Напротив, клетки, выросшие на искусственно обработанных областях центральной роговицы, не смогли экспрессировать ни один из этих маркеров. Количественная оценка сигнала показала, что это дифференциальное выражение было значимым для всех протестированных маркеров (дополнительный рис.9).

Жесткость субстрата контролирует фенотип эпителиальных клеток роговицы in vivo

Затем мы исследовали влияние жесткости субстрата на эпителиальные клетки роговицы in vivo, используя коллагеназу для смягчения центральной области роговицы кролика (рис. 5). Результат лечения коллагеназой интактной роговицы кролика (т.е. без предварительной обработки) отслеживался клиническим наблюдением, биомикроскопией с щелевой лампой и иммуногистохимическим анализом через 1 и 5 дней после вмешательства (рис. 5а).Интересно, что размягчение in vivo вызвало радикальное изменение фенотипа эпителиальных клеток, при этом молекулярные маркеры показали значительные различия в экспрессии по сравнению с соответствующими контролями (имитация обработанных роговиц кролика; рис. 5b) в соответствии с эффектами, полученными in vitro (с коллагеном). гели) и ex vivo (с культивированными на органах роговицами человека). В частности, было показано, что эпителиальные клетки, находящиеся в размягченном центре роговицы кролика, экспрессируют CK15, ABCG2, ΔNp63, ламинин-γ3 и интегрин-α9 через 5 дней после обработки (рис.5б). Напротив, размягчение центральной роговицы индуцировало снижение экспрессии CK3 / 12 в эпителии и приводило к частично разрушенной базальной мембране, как показано сниженными уровнями коллагена-IV и коллагена-VII (рис. 5b). Кроме того, фактор механотрансдукции YAP резко изменился в размягченных роговицах, при этом CK15-положительные клетки показали сниженную экспрессию YAP и потерю его активной (ядерной) формы (nYAP) по сравнению с CK3-положительными клетками из псевдо-обработанных роговиц (рис. 5в).Эти различия в экспрессии были значительными (рис. 5b, c, графики) и представляли важные изменения в нормальном фенотипе эпителиальных клеток центральной роговицы. В частности, значительное снижение ( p = 0,0002) активного nYAP в базальном эпителии после обработки коллагеназой продемонстрировало, что более мягкие субстраты действительно способствовали инактивации YAP, и, кроме того, подтвердило идею YAP-опосредованной механотрансдукции, играющей решающую роль в определении LESC. фенотип in vivo.Более того, процедуры поддерживали целостность и прозрачность роговицы (рис. 5а) и не вызывали какого-либо существенного раздражения, воспаления, отека или изменения внутриглазного давления (ВГД) (дополнительная таблица 1). Кроме того, после обработки роговицы коллагеназой на макроскопическом (рис. 5а) или микроскопическом уровне (дополнительный рис. 10) не наблюдалось заметной неоваскуляризации. Сохранение неповрежденного эпителия и соответствующей ему барьерной функции даже после обработки коллагеназой, вероятно, было основным фактором, защищающим роговицу от этих пагубных воздействий (рис.5а).

Рис. 5

Размягчение центральной ткани роговицы коллагеназой увеличивает экспрессию лимбальных маркеров in vivo. a Схематическое изображение метода обработки коллагеназой, используемого для смягчения центральной области интактной роговицы живых кроликов. Клиническое наблюдение и исследование с помощью щелевой лампы проводились через 1 и 5 дней после вмешательства и сравнивались с результатами до вмешательства (исходный уровень). Центральный эпителий роговицы также анализировали с помощью конфокальной иммунофлуоресценции (3D-реконструкция) через 5 дней после обработки коллагеназой (смягченная) и количественно определяли экспрессию соответствующего маркера.Клетки на размягченной роговице экспрессировали ( b ) более высокие уровни ABCG2, CK15, ΔNp63, интегрина-α9 и ламинина-γ3 (лимбальные маркеры) и более низкие уровни CK3 + 12 и интегрина-α3β1 (маркеры дифференцировки) по сравнению с растущими клетками. на более жестких необработанных роговицах (контроль). Коллаген-IV и коллаген-VII также были обнаружены в обработанных коллагеназой (размягченных) роговицах, хотя и на более низких уровнях по сравнению с контролем. c Экспрессия маркера механотрансдукции YAP также была значительно ниже в CK15-положительных клетках на размягченных роговицах, где он в основном представлял неядерную (неактивную) форму по сравнению с таковой в CK3-положительных клетках на необработанных роговицах (контроль). .Ядра клеток детектировали с помощью DAPI. Масштабные линейки, 50 мкм. Экспрессия маркера была представлена ​​как среднее ± стандартное отклонение. из трех независимых экспериментов ( n = 3; *, ** и *** соответствуют p <0,05, 0,01 и 0,001 после однофакторного дисперсионного анализа, соответственно). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных

Лечение коллагеназой восстанавливает способность лимба поддерживать LESC после щелочного ожога

Наконец, для дальнейшего изучения потенциальной клинической значимости модуляции биомеханики ткани, коллагеназа была использована для смягчения искусственно укрепленной лимба в щелочной среде. обожженные роговицы.Этот тип травмы был выбран из-за того, что ранее он широко использовался для моделирования патологий роговицы, вызывающих фиброз и жесткость роговицы, а также дефицит LESC (LSCD) и потерю. В первом из этих предварительных экспериментов человеческие роговицы, подвергшиеся ожогам щелочью ex vivo, обрабатывали коллагеназой и проверяли их механические свойства, а также их способность поддерживать клетки с LESC-подобным фенотипом (рис. 6). Как и ожидалось, щелочной ожог привел к серьезным изменениям в лимбе роговицы, с удалением большинства ее нефибриллярных элементов и значительным, локализованным и постоянным усилением ее матрицы (рис.6а и б). Эти эффекты, вероятно, были связаны с удалением протеогликана после воздействия щелочи ⁵² . Впоследствии обожженные щелочью роговицы также не смогли поддерживать LESC-подобный фенотип репопулирующих клеток. В частности, LESC, посеянные на лимбе роговицы, обожженной щелочью, показали значительно сниженную экспрессию лимбальных маркеров ABCG2, CK15, ΔNp63 и интегрина-α9, в то же время экспрессируя более высокие уровни маркера дифференцировки CK3 по сравнению с клетками на необожженной контрольной ткани (рис. 6c и d).Кроме того, клетки на обожженной лимбе показали значительное увеличение экспрессии YAP и ядерной локализации ( p = 0,0003 и 0,0002, соответственно) по сравнению с клетками в контрольных тканях (рис. 6e), что позволяет предположить, что потеря фенотипа была вызвана YAP- зависимая передача сигналов механотрансдукции. Однако было показано, что все вредные эффекты устраняются применением коллагеназы на обожженных щелочами роговицах, при этом лечение приводит к снижению плотности коллагеновых фибрилл и значительному снижению жесткости матрикса лимба (рис.6а и б). Но что наиболее важно, восстановление исходной эластичности ткани сопровождалось способностью поддерживать реэпителизацию клетками, экспрессирующими маркеры лимбальных стволовых / предшественников (Fig. 6c and d). Более того, как и ожидалось из наших предыдущих экспериментов, этот ответ сопровождался значительным снижением экспрессии YAP и ядерной локализации (Fig. 6e).

Рис. 6

Смягчение обожженной щелочью ткани роговицы коллагеназой восстанавливает экспрессию лимбальных маркеров ex vivo. a Типичная топография лимбального субэпителиального матрикса после нанесения PBS (контроль), 0,5 M NaOH (щелочь) или NaOH с последующим размягчением (обработкой) коллагеназой всей роговицы человека, проанализированная с помощью атомно-силовой микроскопии (AFM). АСМ сканирование в трех независимых экспериментах показало клиренс компонентов ECM, отличных от фибрилл коллагена, в ткани, подвергшейся щелочному ожогу, и снижение плотности фибрилл коллагена после обработки коллагеназой. Глубина ложной окраски 500 нм. b Анализ методом силовой дистанционной спектроскопии показал, что ожог (щелочь) значительно укрепил лимбальный субэпителиальный матрикс, и что последующее размягчение (лечение) коллагеназой восстановило механические свойства исходной ткани (контроль). График представляет собой распределение рассчитанных значений модуля упругости E (МПа) и соответствующего среднего значения (центральная линия) ± стандартное отклонение. (усы) из трех независимых экспериментов ( n = 3; *** p <0,001). c Репрезентативные конфокальные иммунофлуоресцентные микрофотографии (трехмерная реконструкция) реэпителиализированного лимба после щелочного ожога и лечения коллагеназой с ( d ) количественной оценкой экспрессии соответствующего маркера. Эпителиальные клетки, повторно заселяющие обожженную щелочью ткань лимба ex vivo, экспрессировали значительно более низкие уровни лимбальных маркеров ABCG2, ΔNp63, CK15 и интегрина-α9, показывая при этом более высокую экспрессию маркеров дифференцировки CK3 по сравнению с клетками, растущими на контрольной ткани. e Маркер механотрансдукции YAP также значительно изменился в тканях, которые стали жестче под действием щелочи, при этом репопуляционные клетки демонстрируют повышенную экспрессию YAP и преобладающую ядерную локализацию. Однако лечение коллагеназой успешно восстановило способность обожженных тканей лимба поддерживать клетки, экспрессирующие LESC, маркеры дифференцировки и механотрансдукции на контрольных уровнях. Ядра клеток детектировали с помощью DAPI. Экспрессия маркера была представлена ​​как среднее ± стандартное отклонение. из трех независимых экспериментов ( n = 3; *, ** и *** соответствует p <0.05, 0,01 и 0,001 после однофакторного дисперсионного анализа соответственно). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. Масштабные линейки, 1 мкм ( a ), 50 мкм ( c , e )

Аналогичные результаты наблюдались во второй серии экспериментов, на этот раз с использованием модели химического ожога in vivo. Роговица кролика, подвергшаяся локальному ожогу щелочью, имела повреждение височной половины лимба, при этом носовая половина оставалась нетронутой, чтобы обеспечить возможность повторной эпителизации (дополнительный рис. 11, день 0).На второй день после ожога пораженные участки лимба либо обрабатывали коллагеназой (лечили), либо оставались необработанными (щелочью) (дополнительная таблица 2), а затем сравнивали с неповрежденной лимбальной тканью (контроль). Сразу после ожога пораженный участок лимба стал непрозрачным (рис. 7а). На необработанной роговице размер этого помутнения практически не уменьшился (рис. 7b). Напротив, ткани, обработанные коллагеназой, показали значительное уменьшение площади помутнения по сравнению с тканями, подвергшимися щелочному ожогу ( p = 0.0023) и со временем (90 ± 3–56 ± 5% от исходного размера со 2 по 7 день соответственно; p = 0,002) (рис. 7b), вероятно, за счет восстановления целостности эпителия и барьерной функции (дополнительный рис. 12). Кроме того, обработка обожженной лимба коллагеназой позволила восстановить естественный клеточный профиль ткани (рис. 7c). В частности, новый эпителий, заселяющий обработанную коллагеназой обожженную ткань лимба, показал значительно более высокую экспрессию лимбальных маркеров CK15, ΔNp63, ABCG2 и интегрина-α9, а также более низкую экспрессию маркеров дифференцировки CK3 и α3β1 по сравнению с их необработанными (щелочными) тканевыми аналогами. и профиль экспрессии, аналогичный неповрежденному (контрольному) лимбу (рис.7в и г). Эти клетки, вероятно, происходили из соседнего носового лимба, который оставался неповрежденным во время заражения. Кроме того, уменьшение помутнения во время процесса заживления (рис. 7a) и отсутствие бокаловидных клеток в новом эпителии (рис. 7c; дополнительный рис. 12) предполагают, что восстановление не производилось трансдифференцированными клетками конъюнктивы. Альтернативно, новый эпителий мог бы происходить из дедифференцировки коммитированных клеток роговицы, как недавно было показано, что происходит у мышей после хирургической делеции LESCs, но не после щелочного ожога лимба ⁶ .

Рис. 7

Обработка лимба, обожженного щелочью, коллагеназой восстанавливает экспрессию лимбальных маркеров in vivo. a Типичные изображения химически обожженной роговицы кролика (щелочь) и обожженной щелочью роговицы, получавшей лечение коллагеназой (обработанной), до (исходный уровень) и после ожога (день 0), а также на 2 и 7 день после ожога. Мутность от ожога была ограничена (обведенная линия) и проанализирована на предмет восстановления (вставки) и площади покрытия ( b ) в день 0 (начальная рана), 2 (темно-синий) и 7 (светло-синие полосы).Значения соответствуют средней площади дымки ± стандартное отклонение. из трех независимых экспериментов ( n = 3). c Репрезентативные конфокальные иммунофлуоресцентные микрофотографии (трехмерная реконструкция) химически обожженного (щелочного) и обработанного коллагеназой обожженного лимба (обработанного) на 7 день с ( d ) количественной оценкой экспрессии соответствующего маркера. Ядра клеток детектировали с помощью DAPI. Эпителиальные клетки, повторно заселяющие обожженную щелочью конечность in vivo, экспрессировали значительно более низкие уровни лимбальных маркеров CK15, ΔNp63, ABCG2 и интегрина-α9, показывая при этом более высокую экспрессию маркера дифференцировки CK3 по сравнению с неповрежденной тканью лимба (контроль).Однако лечение коллагеназой успешно восстановило способность обожженной лимба поддерживать клетки, как в контрольных тканях. e Экспрессия маркера механотрансдукции YAP также была значительно ниже в ΔNp63-положительных, CK3-отрицательных клетках на обработанных и контрольных тканях лимба, где он преимущественно представлял неядерную, неактивную форму. Напротив, CK3-положительные, ΔNp63-отрицательные клетки на обожженных щелочами тканях показали значительно более высокую и в основном ядерную экспрессию YAP.Экспрессия маркеров в d , e была представлена ​​как среднее ± стандартное отклонение. из трех независимых экспериментов ( n = 3; *, ** и *** соответствуют p <0,05, 0,01 и 0,001 после однофакторного дисперсионного анализа, соответственно). Исходные данные представлены в виде файла исходных данных. Масштабные линейки, 50 мкм

Интересно, что экспрессия YAP в клетках, повторно заселяющих ткани, обработанные коллагеназой, была аналогична таковой на неповрежденной лимбе, и значительно ( p = 0.0015) ниже, чем на тканях, которые стали жестче из-за ожога щелочью (рис. 7e). Клетки, растущие на обработанных тканях, также показали значительно ( p = 0,019) более низкие уровни ядерного YAP по сравнению с таковыми в щелочных тканях, а именно в базальных слоях эпителия (фиг. 7e), где ΔNp63 продемонстрировал особенно сильную экспрессию. Более того, как ранее наблюдалось в коллагеновых гелях и центральной роговице, вариации экспрессии YAP в лимбе не зависели от топографии субстрата, при применении щелочи и / или коллагеназы не обнаружено явных изменений лимбальных нано- или микротопографических характеристик ( Рис.6 и 7 соответственно).

Лучший аквариумный субстрат (обзор) в 2021 году

Руководство по покупке лучшего аквариумного субстрата

На что следует обратить внимание при покупке субстрата для аквариума

Чтобы получить лучший субстрат для вашего аквариума с растениями, важно сначала учесть несколько вещей.

• Тип обитателей аквариума

Во-первых, вам нужно спросить себя: «Кто обитатели вашего аквариумного жилища?» Если он содержит растения, вам следует выбрать субстрат, обеспечивающий их питательными веществами, необходимыми для их здорового роста.Рекомендуется включать эти питательные вещества в гравий, а не в толщу воды, поскольку корни являются основной средой для растений для получения этих минералов. Субстрат в аквариуме с растениями должен состоять из двух слоев — нижний, заполненный питательными веществами, и верхний, состоящий из обычного гравия или песка, чтобы предотвратить вымывание.

Если аквариум заполнен только рыбами, субстрат должен позволять колонизацию полезных бактерий. Слой субстрата должен быть достаточно мелким, чтобы частицы пищи не опускались в менее насыщенные кислородом области, поскольку это может в конечном итоге привести к образованию токсичного сероводорода.Для морских и рифовых аквариумов следует вводить достаточно кальция и магния, чтобы поднять уровень pH до достаточно высокого уровня.

Существуют разные субстраты для разных экосистем. Тот, который предназначен для пресноводной среды, не может использоваться в морской среде. Поэтому просмотрите информацию о типе выбранного вами субстрата, чтобы определить, для какой воды он предназначен.

Правильное количество субстрата для вашего аквариума с растениями зависит от его вместимости или объема.Например, если емкость для рыбы имеет емкость 55 галлонов, его гравийные слои должны иметь глубину около 2 дюймов. Если есть растения, под гравием можно добавить богатый питательными веществами слой толщиной 2,5 см. Для больших аквариумов слой гравия может увеличиваться до 3 дюймов.

Гравий и другие частицы субстратов в основном доступны в двух размерах — мелком и крупном. Более мелкий гравий придает естественный вид вашему аквариуму с растениями и имитирует естественную среду обитания рыб.С другой стороны, более крупный гравий встречается в более широком разнообразии цветов, что дает вам возможность больше поиграть с украшением. Некоторые из них даже светятся в темноте, делая всю установку намного веселее, чем обычно.

Гравийные субстраты большего размера потребуют более частой очистки, поскольку неиспользованный корм для рыб, оставшийся в их больших промежутках, через некоторое время может стать токсичным. С другой стороны, более мелкий гравий необходимо разрыхлять чаще, потому что они имеют тенденцию сжиматься вместе, создавая зоны резервуаров с незначительным количеством кислорода.

Когда дело доходит до цветов, вы можете выбирать среди множества, но убедитесь, что ни на одном из них нет настоящих цветов краски. Краски могут поклевываться рыбой и причинять ей боль. Если вы хотите выбрать самую безопасную дорогу, выбирайте натуральный гравий, который наиболее удобен для рыб.

Гравий должен быть достаточно гладким и без острых краев, которые могут поранить рыбу. Поэтому, прежде чем оседать субстрат, неплохо провести руками по его образцу и выяснить, достаточно ли он гладкий или нет.

Количество требуемых уровней pH в резервуаре варьируется в зависимости от его обитателей. Некоторым видам рыб, таким как африканские цихлиды, требуется более высокий уровень pH, чем обычно. Таким образом, аквариумам с такими водными существами потребуется субстрат, который буферизует воду, как измельченный коралл. Напротив, такие виды, как скалярии, нуждаются в более низком pH, и поэтому в системе используется субстрат, такой как торфяной мох.

Преимущества субстрата в аквариуме

Большинство субстратов богаты питательными веществами, полезными для аквариумных растений.Они также улучшают общую среду в аквариуме и делают вашу рыбу более счастливой.

Растениям трудно держаться за стеклянную поверхность аквариума. С другой стороны, аквариум с растениями предоставляет им более удобную и устойчивую платформу, на которой они могут стоять.

Субстрат предотвращает загрязнение, удерживая отходы рыбы и пищевые отходы на дне, вместо того, чтобы плавать в воде.

Стеклянная поверхность не кажется рыбам особенно привычной или естественной. Но какой слой субстрата имитирует естественную среду обитания? Абсолютно! Хороший натуральный субстрат значительно повысит уровень их комфорта и счастья.

Связанное сообщение: Светодиодное освещение для аквариумов

Типы субстрата для аквариума

Песок — лучший субстрат для новичка, ведь все рыбы любят его копать и закапывать. Это значительно упрощает очистку, поскольку частицы грязи попадают на его верх, а не теряются в зернах.

Аквариумный гравий с гладкими краями является удобным субстратом для жизни рыб. Они бывают разного размера и цвета, чтобы настроить внешний вид аквариума.

• Коралл и арагонитовая дробленая

Они оба повышают pH в аквариуме и могут принести флюиды соленой воды в пресноводную среду. Однако измельченный коралл нуждается в частой уборке пылесосом, поскольку его светлый цвет не может хорошо скрыть грязь и мусор.

В аквариумах с растениями можно использовать флюорит, латерит, EcoComplete, Aquasoil и аналогичные субстраты для питания и питания.

Часто задаваемые вопросы о лучшем аквариумном субстрате:

Q: Что такое аквариумный субстрат?

A: Субстрат аквариума — это просто вещество, помещенное на дно аквариума как для эстетических, так и для функциональных целей.Он может влиять на фильтрацию, химический состав воды и здоровье жителей. Субстрат также может повлиять на уровень комфорта обитающих в аквариуме водных существ своим цветом и текстурой.

Q: Сколько субстрата мне нужно использовать для аквариума?

A: Как правило, требуется около 1 фунта субстрата на галлон, если вы хотите создать в прямоугольном аквариуме глубину в один дюйм. Кроме того, 5 фунтов гравия, 6 фунтов сухого песка и 8 фунтов влажного песка являются идеальной комбинацией для формирования слоя субстрата толщиной один дюйм внутри резервуара размером 10 × 10 дюймов.

Q: Как создать субстрат для аквариума с растениями?

A: Чтобы создать субстрат для аквариума с растениями, выполните следующие простые шаги. Во-первых, после ополаскивания положите прочную устойчивую основу с богатым минералами субстратом. Затем установите фильтр и нагреватель после заполнения бака дехлорированной водой. Если вы хотите отрегулировать уровень pH, используйте кондиционер для воды. Добавьте лампу для растений для лучшего роста водной растительности. Держите так в течение 2–3 недель, а затем представьте свои аквариумные растения и рыбок и наслаждайтесь!

Связанное сообщение: Лучший обогреватель для аквариума

Q: Как мне очистить субстрат перед добавлением его в резервуар?

A: Чтобы вода в резервуаре не помутнела, тщательно промойте пыльный гравий или отшлифуйте его.Налейте небольшое количество субстрата в чистое ведро и обрызгайте водой из шланга. Не забывайте выливать грязную воду каждый раз, когда закончите стирку.

Q: Как сохранить чистоту носителя для печати?

A: Прежде всего, отключите все электрические компоненты, включая нагреватель, фильтр и насос. Однако перемещать рыб, растения и прочие украшения аквариума не нужно. Выберите подходящий инструмент для очистки — толстый аквариумный сифон для больших резервуаров или пластиковую гибкую трубку для меньших.Поставьте ведро под резервуар, чтобы влить старую воду. Погрузите один конец пылесоса в аквариум, а другой конец поместите в ведро. При необходимости остановите поток воды большим пальцем. После того, как вы слили всю грязную воду, измерьте температуру в аквариуме и убедитесь, что новая вода соответствует этой температуре, чтобы не насторожить рыбу.

Связанное сообщение: Лучший обогреватель для аквариума

Q: Как часто нужно менять субстрат в аквариуме?

A: Подложки, повышающие уровень pH в воде, следует менять каждые несколько месяцев или пару лет.Глиняные основания, такие как Aquasoil, необходимо менять каждые 3-4 года. С другой стороны, гравий и песок менять не нужно, так как они почти нейтральны. Что касается субстратов на растительной основе, их нужно будет часто менять для обеспечения правильного питания и питания.

В: Насколько глубоким должен быть мой серебряный песок?

A: Если в вашем аквариуме есть живые растения, глубина серебряного песка должна быть от 1 дюйма до 1,5 дюйма. Если нет живых растений, он может опуститься ниже 1 дюйма.Слой глубже 2 дюймов может вызвать скопление токсичных анаэробных бактерий.

Связанный пост: Аквариумные насосы

Q: Могу ли я использовать смесь фракций?

A: Смесь зерен разного размера определенно можно использовать, если вы хотите, чтобы ваш аквариум с растениями выглядел естественно или красочно.

Наш лучший выбор

В то время как все субстраты в нашем списке, несомненно, являются отличными продуктами, CaribSea Eco-Complete Substrate, по нашему скромному мнению, является лучшим среди них.Этот пресноводный черный субстрат имеет очень пористую структуру и богат как основными, так и второстепенными элементами. Он способствует активному росту растений, снабжая их питательными веществами через корни, а также быстрее превращает рыбные отходы в растительную пищу с помощью гетеротрофных бактерий. В общем, фантастический субстрат для вашего аквариума!

Агропромышленных отходов и их утилизация с помощью твердофазной ферментации: обзор | Биоресурсы и биопереработка

Сельскохозяйственные остатки

На рисунке 1 показаны два различных типа агропромышленных отходов, т.е.е., сельскохозяйственные остатки и промышленные остатки. Остатки сельского хозяйства можно разделить на полевые и технологические остатки. Полевые пожнивные остатки — это пожнивные остатки, которые остаются на поле после уборки урожая. Эти полевые остатки состоят из листьев, стеблей, семенных коробочек и стеблей, тогда как технологические остатки представляют собой остатки, присутствующие даже после переработки урожая в альтернативный ценный ресурс (Таблица 1).

Рис. 1

Агропромышленные отходы и их виды

Таблица 1 Состав агропромышленных отходов

Эти остатки состоят из патоки, шелухи, жмыха, семян, листьев, стебля, соломы, стеблей, скорлупы, целлюлозы, щетина, кожура, корни и т. д.и используется для кормов для животных, улучшения почвы, удобрений, производства и различных других процессов. Создается огромное количество полевых остатков, и большинство из них не используются. Контролируемое использование остатков полей может повысить эффективность орошения и борьбы с эрозией. В регионе Ближнего Востока основными культурами являются пшеница и ячмень. В дополнение к этому во всем мире также производятся различные другие культуры, такие как рис, чечевица, кукуруза, нут, фрукты и овощи. Сельскохозяйственные отходы дифференцируются на основе их доступности, а также характеристик, которые могут отличаться от других твердых видов топлива, таких как древесный уголь, древесина и древесные брикеты (Zafar 2014).

Промышленные отходы

Огромное количество органических остатков и связанных с ними стоков ежегодно образуется в пищевой промышленности, такой как производство сока, чипсов, мяса, кондитерских изделий и фруктов. Эти органические остатки можно использовать для различных источников энергии. Поскольку население постоянно увеличивается, потребность в пище и ее использование также увеличиваются. Таким образом, в большинстве стран в этом регионе заметно выросли различные отрасли производства продуктов питания и напитков для удовлетворения потребностей в продуктах питания.В таблице 2 показаны различные составы фруктовых промышленных отходов, которые представляют собой различные составы целлюлозы, гемицеллюлозы, лигнина, влаги, золы, углерода, азота и т. Д., И эти компоненты могут подвергаться биохимическому усвоению с образованием полезных продуктов, таких как производство биогаза, био- этанол и другие коммерчески полезные примеры. Примерно 20% производства фруктов и овощей в Индии ежегодно идет в отходы (Rudra et al. 2015), потому что в Индии производится большое количество яблок, хлопка, соевых бобов и пшеницы.Так как производство в стране увеличивалось, это также увеличивало процент отходов, производимых из них. Точно так же отходы пищевой промышленности содержат большое количество БПК, ХПК и других взвешенных веществ. Большинство этих отходов остаются неиспользованными или необработанными, что оказало неблагоприятное воздействие на окружающую среду, а также на здоровье человека и животных, но в составе этих отходов содержится большое количество органических соединений, которые позволили получить различные продукты с добавленной стоимостью, а также снизили стоимость. производства, как описано в таблице 1.

Таблица 2 Состав фруктово-промышленных отходов

В частности, в нефтяной промышленности после отжима масла из семян образуется огромное количество остатков переработки; эти остатки известны как жмыхи. Эти отрасли промышленности вызывают загрязнение воздуха, воды и твердых отходов, поскольку эти остатки содержат высокую концентрацию жира, масла, смазки, взвешенных и растворенных твердых частиц. Жмыхи имеют вариабельность в зависимости от их субстрата (Таблица 3). Жмых бывает разных видов, например жмых из рапса (CaOC), жмых из подсолнечника (SuOC), жмых из кокосового масла (COC), жмых из кунжутного масла (SOC), жмых горчичный (MOC), жмых из пальмовых ядер (PKC), соя. бобовый жмых (SBC), арахисовый жмых (GOC), хлопковый жмых (CSC), оливковый жмых (OOC), рапсовый жмых (RSC) (Ramachandran et al.2007). Эти обсуждаемые агропромышленные остатки относительно дешевы, содержат большое количество компонентов, которые имеют неограниченную перспективу использования в качестве альтернативных субстратов для ферментации.

Таблица 3 Состав жмыхов

Твердотельная ферментация (SSF)

Любые биотехнологические процессы, в которых организмы растут на нерастворимом материале или твердых субстратах в отсутствие или почти полное отсутствие свободной воды, признаются как твердофазная ферментация (SSF) (Bhargav et al. 2008 г.). Обычно используемые субстраты в SSF — это зерна злаков (рис, пшеница, ячмень и кукуруза), семена бобовых, пшеничные отруби, лигноцеллюлозные материалы, такие как солома, опилки или древесная стружка, а также широкий спектр материалов растительного и животного происхождения. Соединения этих субстратов являются полимерными и остаются нерастворимыми или труднорастворимыми в воде, но большинство из них имеют низкую стоимость, легко доступны и представляют собой концентрированный источник питательных веществ для роста микробов. Приготовление пищи путем ферментации — один из древнейших методов.Критическое изучение литературы показывает, что небольшое количество воды или отсутствие воды в SSF предлагает несколько преимуществ, таких как простота извлечения продукта, низкая стоимость всего производственного процесса, меньший размер ферментера, сокращение последующей обработки, а также снижение потребности в энергии для перемешивание и стерилизация (Pandey 2003). Для успешного процесса SSF необходимо учитывать различные факторы, такие как микроорганизмы, используемая твердая подложка, активность воды, температура, аэрация и тип используемого ферментера, прежде чем начинать какой-либо процесс ферментации.Микроорганизмы, используемые в SSF, могут быть отдельными чистыми культурами, смешанными идентифицируемыми культурами или консорциумом смешанных местных микроорганизмов. Некоторые процессы SSF, например, производство темпе и онкома, требуют избирательного роста микроорганизмов, таких как плесень, которым требуется низкий уровень влажности для осуществления ферментации с помощью внеклеточных ферментов, секретируемых ферментирующими микроорганизмами. В таблице 4 показаны различные микроорганизмы, такие как грибы, дрожжи и бактерии, которые используются в процессах SSF. Формы часто используются в SSF для максимального увеличения производства продуктов с добавленной стоимостью, поскольку они естественным образом растут на твердых субстратах, таких как куски дерева, семена, стебли и корни. Однако бактерии и дрожжи, которым для эффективного брожения требуется сравнительно более высокое содержание влаги, также могут использоваться для SSF, но с меньшим выходом. SSF — это многоступенчатый процесс, включающий следующие этапы:

Таблица 4 Недавние исследования твердофазной ферментации с использованием различных микроорганизмов и агропромышленных отходов

1. 1.

   Выбор подложки.

2. 2.

   Предварительная обработка субстрата механической, химической или биохимической обработкой для улучшения доступности связанных питательных веществ, а также для уменьшения размера компонентов, например, измельчение соломы и измельчение растительных материалов для оптимизации физических аспектов процесса. Однако стоимость предварительной обработки должна быть сбалансирована с конечной стоимостью продукта.

3. 3.

   Гидролиз преимущественно полимерных субстратов, например полисахаридов и белков.

4. 4.

   Процесс ферментации для использования продуктов гидролиза.

5. 5.

   Последующая переработка для очистки и количественного определения конечных продуктов.

Большинство стран Азии и Африки регулярно использовали различные ферментированные продукты как часть своего рациона. Различные формы активированного кислорода, такие как свободные и несвободные радикалы, такие как супероксид-анион-радикалы (O ₂ ^—), гидроксильные радикалы (OH) и H ₂ O ₂ и выделенный кислород (O ₂ ) , соответственно, сообщили, что они могут привести к окислительному повреждению живых организмов. Таким образом, эти виды вызывают значительную часть многих заболеваний, таких как рак, эмфизема, атеросклероз и артрит (Jacobs et al. 1999). SSF в основном использовался с древних времен для обработки пищевых продуктов, но в настоящее время он привлекает большое внимание из-за все более широкого использования различных типов органических отходов и увеличения производства продуктов с добавленной стоимостью (Pandey et al. 2000; Wang и Ян 2007). Поиск устойчивых и экологически чистых процессов биоконверсии органических отходов в ценные продукты может заменить невозобновляемые материалы, а также преобразовать химические процессы в более чистые методы в промышленном секторе, что подчеркивает потенциал УМТ.Особый интерес к SSF обусловлен его относительно простым процессом, в котором используется большое количество недорогих биоматериалов с минимальной предварительной обработкой для биоконверсии или без нее, с меньшим образованием сточных вод и способностью моделировать подобные микросреды, благоприятные для роста микроорганизмов (Singhania и др. 2009). Кроме того, SSF открыла новую парадигму биоконверсии твердых органических отходов путем производства биологически активных метаболитов как в лабораторных, так и в промышленных масштабах. Широко сообщалось о применении SSF в производстве различных биопродуктов, включая ферменты, органические кислоты, биоудобрения, биопестициды, биосурфактанты, биоэтанол, ароматические соединения, корма для животных, пигменты, витамины и антибиотики.Точно так же SSF моделирует естественные микробиологические процессы, такие как компостирование и силосование (Thomas et al. 2013). Таким образом, ферментация в твердом состоянии и ее влияние на образование продуктов с добавленной стоимостью в этом процессе рассматриваются и обсуждаются.

Субстрат, используемый для твердофазной ферментации

В качестве субстрата для SSF используются твердые отходы различных отраслей, таких как пищевая, пивоваренная и винная, сельское хозяйство, бумага, текстильная промышленность, производство моющих средств и кормов для животных. Подложки, которые остаются твердыми, также имеют низкий уровень влажности, что является предпочтительным для SSF.На рисунке 2 показаны некоторые из субстратов, используемых для SSF. Несколько исследователей использовали различные субстраты, предназначенные для их исследования, такие как рис ( Oryza sativa ) (Sadh et al. 2017a), seim ( Lablab purpureus ) (Sadh et al. 2017b, c), горох черноглазый ( Vigna unguiculata ) (Chawla et al.2017), арахисовый жмых ( Arachis hypogea ) (Sadh et al. 2017d). Орзуаа и др. (2009) изучили десять агропромышленных отходов, используемых на предмет их пригодности в качестве носителя иммобилизации грибов для SSF.Они обнаружили, что некоторые из отходов имеют больший потенциал для использования в качестве носителя для иммобилизации в SSF, потому что они обладают высокой водопоглощающей способностью и приемлемы в качестве хорошей скорости роста микроорганизмов.

Рис.2

Субстраты, используемые для твердофазной ферментации

Утилизация агропромышленных отходов методом твердофазной ферментации

Сельскохозяйственные отходы используются для производства продукции с высокой добавленной стоимостью. На рисунке 3 показано схематическое изображение приложений с разных подложек.Большинство полевых отходов можно использовать во всем мире для производства биотоплива, биогаза вместо тепла и энергии с помощью различных технологий. Различные субстраты имеют разный состав и в зависимости от их состава используются для производства различных ценных продуктов. Некоторые из ценных продуктов описаны ниже.

Рис.3

Схематическое изображение применения различных подложек

Производство биотоплива

Биотопливо остается важным, потому что оно используется в качестве заменителя ископаемого топлива.Предыдущие исследования показали производство биотоплива из положительных остатков агропромышленного комплекса, таких как рисовая солома, отходы сладкого картофеля, опилки, картофельные отходы, стебли кукурузы, жмых сахарного тростника и отходы сахарной свеклы (Duhan et al. 2013; Kumar et al.2014, 2016 ). В 2011 году во всем мире производство биоэтанола увеличилось, о чем свидетельствует производство 85 миллиардов литров биоэтанола (Avci et al. 2013; Saini et al. 2014). С помощью сельскохозяйственных остатков он способствует снижению обезлесения за счет уменьшения нашей зависимости от древесной биомассы леса.Кроме того, у растительных остатков небольшое время сбора урожая, что сокращает их дополнительное количество, которое постоянно используется для производства биоэтанола (Limayema ​​and Ricke 2012).

Многие исследователи завершили производство этанола из материалов, имеющих лигноцеллюлозный состав (Cadoche and Lopez 1989; Bjerre et al. 1996). Наджафи и др. (2009) также изучили производство биоэтанола из различных сельскохозяйственных остатков, полученных от различных сельскохозяйственных культур. Saini et al. (2014) обсудили различные сельскохозяйственные отходы для производства биоэтанола второго поколения.Они сосредоточились на использовании лигноцеллюлозного состава различных отходов агропромышленного комплекса. Они пришли к выводу, что биотопливо является полезной альтернативой различным ископаемым видам топлива, таким как бензин и дизельное топливо. На основе их обсуждения и обзора различных подходов к производству биотоплива ясно показано, что биотопливо на основе лигноцеллюлозы является экономически эффективным, а также экологически чистым и альтернативным источником энергии на ближайшее будущее. Другое исследование производства биогаза с использованием различных сельскохозяйственных остатков из разных источников, а также двух сорняков, т.е.e., Typha angustifolia L. и Eichornia crassipes solms был проведен Paepatung et al. (2009).

В большинстве развивающихся стран быстрый рост населения, а также их быстрое развитие в процессе индустриализации вызывают высокий спрос на недорогие источники энергии за счет использования экономичных сельскохозяйственных остатков. В этих странах имеется большое количество отходов, необходимых для производства биотоплива. Mushimiyimana и Tallapragada (2016) производили биоэтанол из растительных отходов методом ферментации с помощью дрожжей Saccharomyces cerevisiae .Они использовали обычные овощные отходы, такие как кожура картофеля, кожура моркови и кожура лука. Производство биоэтанола могло бы стать лучшей альтернативой потреблению сельскохозяйственных остатков. Использование стеблей банана в качестве субстрата для производства биоэтанола является хорошей альтернативой в Индии из-за огромной доступности псевдостеблей банана в качестве отходов. Ingale et al. (2014) производили биоэтанол, используя псевдостебель банана в качестве субстрата с предварительной обработкой Aspergillus ellipticus и Aspergillus fumigatus .Maiti et al. (2016) использовали агропромышленные отходы для производства бутанола с использованием Clostridium beijerinckii . Максимальное количество бутанола, то есть 11,04 г / л, было получено через 96 часов ферментации из сточных вод агропромышленных отходов крахмальной промышленности (SIW). Таким образом, использование недорогих и экологически чистых сельскохозяйственных отходов для производства ценного биотоплива — лучший способ удовлетворить потребность в энергии за счет ограниченных ресурсов.

Антиоксидантные свойства

Антиоксиданты известны как поглотители радикалов, потому что они защищают человеческий организм от свободных радикалов, вызывающих ряд заболеваний, включая ишемию, астму, анемию, процессы старения, деменции и артрит.Из-за отсутствия знаний о молекулярном составе природных антиоксидантов их использование ограничено. Природные антиоксиданты, как правило, более безопасны, а также обладают противовирусными, противовоспалительными, противораковыми, противоопухолевыми и гепатопротекторными свойствами (Nigam et al. 2009).

SSF можно использовать для усиления антиоксидантной активности различных субстратов с помощью микроорганизмов. Антиоксиданты, а также противораковые агенты также производились из отходов ананаса в качестве субстрата для SSF. Отходы ананаса включают внешнюю кожуру и центральную часть плода и составляют около 50% от общей массы плода.На основании своих результатов исследователи пришли к выводу, что ферментированные отходы ананаса обладают повышенным содержанием белка, клетчатки, фенольных соединений и антиоксидантной активностью. Поэтому они предположили, что отходы ананаса могут быть альтернативой новым полезным стратегиям (Rashad et al. 2015).

Остатки различных фруктов и овощей, например кожуры фруктов и овощей, обычно называют отходами или непригодными для использования. Но многие исследования сосредоточились на этих пилингах и дали хорошие результаты.Таким образом, эти отходы считаются ценным сырьем для производства различных фармацевтических продуктов (Parashar et al. 2014). Дуда-Чодак и Тарко (2007) исследовали антиоксидантные свойства, общее количество полифенолов и содержание танинов в семенах и кожурах некоторых избранных фруктов. В ходе своего исследования они обнаружили, что кожура отобранных фруктов обладает максимальной активностью по очистке, а также имеет высокое содержание полифенолов в кожуре по сравнению с отобранными семенами.

Апельсиновая кожура, экстрагированная различными растворителями, проявляет разную антиоксидантную активность (Hegazy and Ibrahium 2012).Сингх и Генита (2014) обнаружили максимальный процент антиоксидантной активности в кожуре граната среди кожуры лимона и апельсина. Исследование фракций арахиса, таких как кожица, скорлупа, сырое и вареное ядро, было проведено Win et al. (2011). Они оценили их свойства антиоксидантов и пришли к выводу, что активность антиоксидантов, а также фенольных соединений кожуры арахиса была максимальной, чем активность других частей скорлупы арахиса, вареного и сырого ядра. Полевые остатки, такие как стебель, листья и стебли, также использовались для антиоксидантной и противомикробной активности.Несколько исследователей изучили антиоксидантные свойства нескольких экстрактов стеблей, листьев и плодов Argemone mexicana и Thuja orientalis (Duhan et al. 2011a, b; Saharan et al. 2012; Saharan and Duhan 2013) смеси нескольких лекарственные растения, фракции пшеницы, рис (Rana et al. 2014; Duhan et al. 2015a, b, 2016) и обнаружили высокую антиоксидантную активность в экстрактах этих растений.

Sadh et al. (2017a, b) провели исследование, чтобы выяснить влияние твердофазной ферментации на высвобождение фенольных соединений и впоследствии на улучшение антиоксидантной активности Lablab purpureus (seim), Oryza sativa (рис) и их комбинации с использованием GRAS. нитчатые грибы, т.е., A. awamori и A. oryzae . Они наблюдали значительное увеличение уровня TPC после ферментации семян и муки с выбранными штаммами по сравнению с неферментированным субстратом. С увеличением уровня TPC антиоксидантная активность ферментированных образцов также увеличивалась в этанольном экстракте всех субстратов с A. awamori, и A. oryzae.

Sadh et al. (2017c) использовали комбинацию субстрата, то есть риса и семян, чтобы выяснить влияние твердофазной ферментации на высвобождение фенольных соединений, антиоксидантов и некоторых других функциональных свойств.Из их исследования было подтверждено анализом экстракта ферментированных образцов, что они обладают высокими фенольными, антиоксидантными и функциональными свойствами, чем неферментированные, поскольку во время ферментации происходит много биохимических изменений, поэтому ферментация использовалась для улучшения или трансформации пропорции питательных и антипитательных компонентов субстратов, которые влияют на свойства продукта, такие как биохимические или функциональные.

Производство антибиотиков

Антибиотики — это вещества, вырабатываемые различными микроорганизмами, которые избирательно подавляют рост или убивают другие микроорганизмы в очень низких концентрациях (Tripathi 2008).Различные отходы сельского хозяйства используются для производства различных антибиотиков. Были проведены различные исследования с использованием отходов агропромышленного комплекса и производства антибиотиков. Ифуду (1986) использовал кукурузные початки, опилки и рисовую шелуху в качестве сырья для производства антибиотика, то есть окситетрациклина. Asagbra et al. (2005) успешно получили окситетрациклин с SSF, потребляя в качестве сырья скорлупу арахиса со штаммом Streptomyces rimosus . Ян и Свей (1996) и Тобиас и др.(2012) также поддерживают производство окситетрациклина с использованием сельскохозяйственных отходов.

Стоимость производства антибиотиков была значительно снижена за счет использования недорогого источника углерода из различных сельскохозяйственных остатков. Эти остатки можно использовать в качестве замечательной замены для создания неомицина и других антибиотиков (Vastrad and Neelagund 2011a). Vastrad и Neelagund (2011b) изучали производство внеклеточного рифамицина B путем твердофазной ферментации с помощью Amycolatopsis med Mediterranean MTCC 14 с использованием жмыха в качестве сырья, которое также рассматривается как отходы агропромышленного комплекса. .Среди различных агропромышленных отходов два из них, а именно кокосовый жмых и скорлупа арахиса, показали максимальное производство антибиотиков. Поставка внешних источников энергии использовалась для увеличения производства антибиотика.

Oncom production

Oncom — это местный ферментированный продукт из Индонезии, изготовленный из нескольких сельскохозяйственных отходов. Есть три типа онкомов. Самый известный из них — арахисовый жмых (отходы заводов по переработке арахисового масла).Это oncom kacang и популярно на Западной Яве (Van Veen et al. 1968; Beuchat 1986). Второй тип — это oncom tahoo, популярный в Джакарте. Его готовят из твердых отходов таху, соевого творога. Его подготовка аналогична приготовлению онкома качанг. Третий тип производится из твердых отходов крахмальной муки маш ( Phaseolus radiata ) (Hunkwe) и называется oncom ampas hunkwe (Steinkraus 1983).

Производство темпе

Темпе — это ферментированный продукт, который используется в большинстве развивающихся, а также в развитых странах. Темпе, особенно в Индонезии и Малайзии, изготавливается индивидуально дома или на небольших предприятиях. Аромат и текстура ферментированного продукта, то есть темпе, превосходят неферментированный продукт. Использование вареных соевых бобов в производстве темпе показало лучшие результаты по сравнению с использованием пропаренной или автоклавной техники. Вареные соевые бобы также давали мягкий продукт, как темпе (Мак, 1986).

Штаммы Rhizopus используются для производства темпе, поскольку они обладают способностью разлагать сырье в зависимости от своего состава.Некоторые исследователи предположили, что использование отходов соевого молока дает лучший темпе, а также является альтернативным субстратом или сырьем для производства экономичного, а также улучшенного питанием темпе. Эти исследования также показали, что содержание белка в темпе значительно улучшилось после использования отходов соевого молока. Таким образом, отходы соевого молока можно использовать в качестве заменителя сырья для приготовления богатой белком пищи для человека, а не выбрасывать. В Индонезии доступны различные виды продуктов темпе и подобных темпе (Лим, 1991).

Производство ферментов

Отходы агропромышленного комплекса имеют различный состав, который поддерживает рост микроорганизмов, в результате ферментации образуются различные ценные ферменты. Эти отходы используются как сырье. Скорость роста грибов повышается за счет использования этих субстратов, что приводит к превращению лигноцеллюлозного субстрата в менее сложный за счет разрушающего действия нескольких ферментов. Один из важных ферментов, то есть амилаза, использовался в промышленности по переработке крахмала для разложения полисахаридов на сахарные компоненты (Nigam and Singh 1995; Akpan et al.1999). Kalogeris et al. (2003) изучали различные сельскохозяйственные отходы для производства различных целлюлолитических ферментов, таких как эндоглюканаза и β-глюкозидаза, путем культивирования в твердом состоянии. Они использовали штамм термофильного гриба — Thermoascus aurantiacus. Они предположили, что сельскохозяйственные отходы или побочные продукты являются недорогим источником питания для твердофазного культивирования с целью производства эндоглюканазы и β-глюкозидазы. Topakas et al. (2004) использовали кукурузные початки для производства фенольных смол с твердофазной ферментацией в дополнение к ферментативной обработке сочетания.Они также изучили ферментативное производство, такое как производство циннамоилэстеразы и производство ксиланазы. Отходы пищевой промышленности, такие как кожура, семена, жмыхи и полевые остатки, такие как рисовые отруби и пшеничные отруби, также используются для производства амилазы и глюкоамилазы A. awamori при твердофазной ферментации (Ellaiah et al.2002; Negi и Banerjee 2009; Suganthi et al.2011). Сообщалось также о продукции α-амилазы Aspergillus niger MTCC 104 с использованием твердофазной ферментации (Duhan et al.2013; Kumar et al. 2013а, б). Buenrostro et al. (2013) использовали четыре побочных продукта агропромышленности, такие как жмых сахарного тростника, кукурузные початки, стебли канделильи и кокосовую шелуху, для производства эллагитанназы, фермента, используемого для биоразложения производства эллаговой кислоты и эллагитаннинов. Они обнаружили, что наивысшее производство кукурузы, за ней следуют жмых сахарного тростника, кокосовая шелуха и стебли канделильи. Производство ферментов липазы и их оптимизация были выполнены Oliveira et al. (2017) использование жмыхов в качестве субстрата из агропромышленных отходов.Они использовали Aspergillus ibericus для производства липазы. Наибольшее производство липазы было обнаружено в жмыхе из пальмового масла (PKOC). Аналогичным образом Saharan et al. (2017) провели исследование, чтобы узнать влияние ферментации на фенольные соединения, флавоноиды и активность по улавливанию свободных радикалов широко используемых злаков, а также изучили роль ферментов α-амилазы, ксиланазы и β-глюкозидазы в высвобождении полифенолов и антиоксидантов. при твердофазном брожении круп. Результаты показали положительную корреляцию между полифенолами и активностью ферментов.Точно так же были проведены различные ферментные анализы, такие как α-амилаза, ксиланаза, β-глюкозидаза и липаза, во время ферментации арахисового жмыха с использованием A. oryzae , что привело к значительному повышению активности ферментов во всех анализах (Sadh et al. 2017e) ). Таблица 5 показывает несколько исследований, которые были проведены по конструированию различных ферментов с использованием остатков агропромышленного комплекса.

Таблица 5 Исследования продукции ферментов микроорганизмами с использованием отходов агропромышленного комплекса

Производство грибов

Гриб представляет собой уникальное плодовое тело и может быть эпигейным или гипогенным по происхождению.Грибы используются либо как богатая белком пища, либо как средство биоремедиации. Отходы и остатки агропромышленных линго-целлюлозных продуктов используются в качестве биоконсерваторов для контролируемого выращивания съедобных грибов. Связанную с окружающей средой проблему с остатками сельскохозяйственных культур можно решить путем выращивания грибов контролируемым образом, используя эти отходы в качестве сырья. Производство грибов стало заметным методом биотехнологии для повышения ценности агропромышленных отходов.Производство грибов также продемонстрировало свою силу как с экологической, так и с экономической точки зрения за счет преобразования остатков сельскохозяйственных культур с использованием различных микроорганизмов (Chang 2006; Randive 2012). Производство грибов — хороший пример извлечения пищевых белков с использованием малых или больших биологических процессов из лигноцеллюлозных материалов (Chiu and Moore 2001).

Джонатан и Бабалола (2013) изучили 16 различных агропромышленных отходов для выращивания съедобных грибов, то есть Pleurotus tuber — regium .Вид Pleurotus обычно известен как вешенки. Использование таких агропромышленных остатков для выращивания грибов привело к модификации пищевого белка в отношении плодовых тел грибов (Lakshmi and Sornaraj 2014). Стебли банана и трава баия также использовались для выращивания Pleurotus sajor — caju (Siqueira et al. 2011). Результаты производства Pleurotus с использованием стеблей банана и травы бахия в качестве субстрата показали, что для успешного выращивания гриба не требуется никаких других добавок, таких как пшеничные и рисовые отруби.

Съедобные вешенки — прекрасное лакомство во многих регионах мира (Jonathan et al. 2008). Randive (2012) культивировал и изучал рост, а также питательный состав вешенки, используя различные остатки сельскохозяйственных культур в качестве субстрата. Он определил примерный состав грибов, такой как содержание белка, клетчатки, зольности, содержания липидов, содержания влаги и углеводов. По результатам он предположил, что даже один и тот же вид грибов имеет различный питательный состав по сравнению друг с другом.Однако все полученные грибы были богаты белком. Так, в случае дефицита белка он предложил употреблять вешенку в рационе. Вешенка также может быть полезна при сердечно-сосудистых заболеваниях и диабете. В Южной Америке было проведено исследование по выращиванию вешенки с использованием кофейной шелухи в качестве субстрата (Murthy and Manonmani 2008). Бабу и субхасри (2010) выращивали два гриба Pleurotus , т. Е. Pleurotus eous и Pleurotus platypus , используя отходы агропромышленного комплекса.В своем исследовании они обнаружили повышенное количество белка, липидов, углеводов и т. Д. При использовании рисовой соломы в качестве субстрата. Таким образом, они также предложили использовать съедобные вешенки из-за высокого содержания белка, а также предложили использовать рисовую солому в качестве субстрата для успешного выращивания грибов (Akinyele et al. 2012; Kumhomkul and Panich 2013).

Другие подходы с использованием SSF

Помимо этих исследований, здесь также обсуждаются некоторые другие полезные подходы с использованием SSF (рис. 4).

Рис. 4

Применение агропромышленных отходов

Производство белка отдельными клетками

Mondal et al. (2012) изучали производство одноклеточного белка (SCP) из фруктовых отходов. Они использовали кожуру огурца и апельсина в качестве субстрата для производства SCP с помощью S. cerevisiae с использованием глубинной ферментации. Они обнаружили, что кожура огурца производит большее количество белка по сравнению с кожурой апельсина. Было высказано предположение, что эти фруктовые отходы могут превращаться в SCP с помощью подходящих микробов.Продукты, полученные в результате биоконверсии отходов агропромышленности, экономичны и содержат большое количество белка в питательных веществах.

Производство поли (3-гидроксимасляной кислоты)

Цитрусовые во всем мире потребляются для различных промышленных целей, таких как фруктовые соки и джемы. Таким образом, в этих отраслях промышленности также образуется колоссальное количество отходов в виде остатков кожуры или в другой форме, но эти отходы цитрусовых можно использовать в ферментации, поскольку они содержат большое количество углеводов.Sukan et al. (2014) использовали отходы апельсиновой корки для производства Poly (3-HB). Их результаты показали, что апельсиновая корка — это богатые и неиспользованные агропромышленные отходы. Они впервые сообщили о производстве Poly (3HB) с использованием апельсиновой корки в качестве единственного источника углерода с очень простым методом предварительной обработки.

Производство биосурфактанта

Большинство видов бактерий встречается на загрязненных нефтью участках, и эти виды бактерий обладают способностью производить полезные или полезные для человечества продукты.Сараванан и Виджаякумар (2014) изолируют бактериальный штамм, то есть Pseudomonas aeruginosa PB3A из загрязненного нефтью участка. Они использовали штамм для производства биоповерхностно-активного вещества, используя агроотходы, такие как касторовое масло, подсолнечное масло, ячменные отруби, арахисовый жмых и рисовые отруби. Они использовали эти отходы в качестве богатого альтернативного источника углерода для производства биоповерхностно-активного вещества с использованием изолированного штамма P. aeruginosa .

Производство ксантана

Ксантан — это тип экзополисахаридов, производимых из видов Xanthomonas .Ксантан используется в качестве пищевых добавок. Таким образом, производство ксантана из агроотходов — ценный подход как рентабельный продукт. Vidhyalakshmi et al. (2012) провели исследование производства ксантана из различных остатков агропромышленного комплекса. Они произвели ксантан SSF с помощью X. campestries , X. citri , X. oryzae и X. musacearum . Самый высокий уровень ксантана был произведен X. citri на картофельной кожуре, т.е. 2,90 г / 50 г, за которыми следовали 2.87 г / 50 г, 1,50 г / 50 г и 0,50 г / 50 г по X. campestries , X. oryzae и X. musacearum соответственно.

Производство носителей иммобилизации

Orzuaa et al. (2009) изучили десять агропромышленных отходов, включая кожуру лайма, апельсиновую корку, жмыхи яблок, скорлупу фисташек, пшеничные отруби, кокосовую шелуху и т.д. Перед тем, как продолжить исследование, они охарактеризовали агропромышленные отходы, прошедшие физико-химическую обработку.Наконец, Орзуаа и др. (2009) пришли к выводу, что из десяти агропромышленных отходов четыре из них, включая Citrus aurantifolia , Malus domestica , Citrus sinensis и Cocos nucífera , обладают чрезмерным потенциалом в качестве носителя иммобилизации для SSF. Эти агропромышленные отходы могут быть использованы в дальнейшем как с экономической выгодой, так и с экологической точки зрения для управления отходами.

Размер частиц, соотношение посевного материала и субстрата и влияние питательных сред на выход биометана из пищевых отходов, возобновляемые источники энергии

В этом исследовании изучается влияние уменьшения размера частиц при различных соотношениях посевного материала и субстрата и добавлении питательных сред на оценку производства биометана из пищевых отходов в мезофильных условиях партии. Были использованы два разных образца пищевых отходов, и был выбран лучший метод для проверки потенциала биометана на основе их характеристик и выхода метана. Полученные результаты показывают, что соотношение посевного материала к субстрату 3: 1 и 4: 1 помогло стабилизировать испытательные реакторы с меньшими размерами частиц 1 мм и 2 мм, соответственно. Следовательно, сообщалось об общем увеличении выхода биометана на 38% (т.е. с 393 нмLCH ₄ gVS ^-1 _{добавлено} до 543 нмLCH ₄ gVS ^-1 _{добавлено} ).Это потенциально может означать лучшую оценку выхода энергии от анаэробного сбраживания пищевых отходов (т. Е. На 43,5% выше выход энергии, чем электричество из биогаза, с использованием блоков комбинированного производства тепла и электроэнергии (ТЭЦ) промышленного масштаба). Хотя добавление питательных сред не увеличивало выход метана при оптимальном соотношении посевного материала к субстрату (3: 1) и размеру частиц (1 мм), было обнаружено, что его применение помогло стабилизировать переваривание пищевых отходов за счет предотвращения накопления летучих жирных кислот и высоких Соотношение пропионовой и уксусной кислот, следовательно, улучшение общей кинетики теста с уменьшением времени задержки на 91% с 5.От 6 до 0,5 суток. Эта работа подтверждает важность ключевых переменных, которые следует учитывать во время тестов на потенциал биометана, используемых для оценки выхода метана из образцов пищевых отходов, которые, в свою очередь, могут потенциально увеличить производительность системы анаэробного сбраживания, обрабатывающей пищевые отходы, для дальнейшего увеличения общего выхода энергии.

中文 翻译 ：

---

粒径 ， 接种 物 与 底 物 的 比例 和 营养 介质 对 食物 垃圾 中 生物 甲烷 的 影响

研究 在 不同 批次 的 中 温 条件 下 ， 不同 接种 物 营养 的 添加 对 降低 不同 垃圾其 甲烷 选择 生物 甲烷 潜力 的 最佳 方法。 获得 的 结果 表明 ， 接种 物 与 底 物 的 比例 为 为 3 ： 1 和 4 ： 1 有助于 稳定 分别 具有 1 мм 和 2 мм 小 粒径 的 测试 反应 器。 因此 ， 38 ％ 的 总 的 生物 甲烷 产量 增加 报道 （即 ， 从 393 NmLCH ₄ GVS ^-1 _加入 到 543 个 NmLCH ₄ GVS 900 — GVS ₄ — GVS ₄ GVS 1 _加入 ）。 可能 意味着 食物 垃圾 的 厌氧 消化 产生 的 能量 输出 （（即 ， 使用 的规模 规模 的 热电 （（CHP） 装置 ， 提高 提高 43.